网膜素能降低糖尿病动脉硬化大鼠主动脉胶原Ⅲ含量

目的探讨过表达网膜素对糖尿病动脉硬化大鼠主动脉胶原含量的影响。方法选用60只1月龄雄性Wistar大鼠,按随机数字表法分为正常对照组(NC组; n=8)和实验组(n=52)。实验组采用高脂高糖饲料喂养联合尾静脉注射2%链脲佐菌素(30 mg/kg),建立糖尿病大鼠模型;成模的糖尿病大鼠再灌胃给予维生素D3(70万IU/kg),继续喂养16周,建立糖尿病合并动脉硬化大鼠模型。将最终24只糖尿病动脉硬化大鼠,依随机数字表法分为糖尿病动脉硬化组(DAC组; n=8)、糖尿病动脉硬化+空病毒组(DAC+E组; n=8)和糖尿病动脉硬化+网膜素组(DAC+O组; n=8)。将150μL携带人网膜素基因ITLN1-AAV9的腺相关病毒和携带空质粒的病毒经尾静脉分别注射至DAC+O组和DAC+E组,等量生理盐水注射至NC组和DAC组。继续高脂饲料喂养4周,处死大鼠,测定血清及肝脏网膜素、血脂水平;取主动脉进行HE染色;应用定量实时聚合酶链反应测定胶原Ⅰ、Ⅲ、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9 mRNA含量; Western blot测定主动脉胶原Ⅰ、Ⅲ、MMP-2、MMP-9蛋白含量;黄嘌呤氧化酶法测定主动脉超氧化物歧化酶(SOD)含量,硫代巴比妥酸缩合法测定主动脉丙二醛(MDA)水平。结果 (1)与NC组相比,糖尿病动脉硬化大鼠血清中大鼠网膜素水平显著下降。给予携带人网膜素基因的腺相关病毒静脉注射后,在DAC+O组的大鼠血清中测定人网膜素为(101.0±0.2)μg/L,肝脏中测得人网膜素为(98.3±1.9)μg/L,在其他组别的相应组织中未测出人网膜素。(2)与DAC组相比,DAC+E组和DAC+O组血清血脂谱和主动脉MDA均显著下降,SOD升高,但后2组间差异无统计学意义。(3) DAC组主动脉内膜部分脱落,平滑肌增生,局部透明变性并钙化。DAC+O组内膜完整,局部管壁增厚,平滑肌增生和钙化程度较DAC组明显改善。(4)与DAC+E组相比,DAC+O组胶原Ⅰ、ⅢmRNA表达显著下降,胶原Ⅲ蛋白表达显著下降。与DAC+E组相比,DAC+O组MMP-2、MMP-9的mRNA和蛋白表达差异均无统计学意义。结论在糖尿病动脉硬化大鼠体内,过表达人网膜素能减少主动脉胶原Ⅲ的表达量,减轻动脉硬化,对氧化应激水平无明显影响。