上海地区幽门螺杆菌对克拉霉素耐药的相关基因检测

目的通过荧光PCR熔解曲线方法直接检测临床样本中幽门螺杆菌(Hp)对克拉霉素耐药基因,了解上海地区Hp耐克拉霉素基因的分布特征,并为临床快速检测Hp对克拉霉素耐药性提供一种有效的方案。方法收集2017年9-12月复旦大学附属中山医院消化科就诊并接受胃镜检查的快速尿素酶试验Hp阳性患者的胃黏膜组织标本80份,使用荧光PCR熔解曲线法直接检测黏膜样本中Hp种特异性23S rRNA的区域并对扩增的核酸进行荧光标记,通过检测荧光变化绘制其熔解曲线,以确定Hp的23S rRNA突变情况;采用DNA测序技术直接检测标本中Hp克拉霉素23S rRNA耐药基因突变位点。并对两种方法的结果进行Kappa检验统计学比较。结果 80份胃黏膜组织标本使用荧光PCR熔解曲线法共检测69份Hp阳性,11份Hp阴性,阳性率为86.2%。在69份Hp阳性标本中24份标本存在23SrRNA第2142或2143位点的变异,突变率34.8%。使用DNA测序法共检测出64份Hp阳性,阳性率为80.0%。其中23例患者的标本检测到23S rDNA耐药基因的突变,突变率35.9%。两种方法检测Hp耐药基因突变的阳性符合率、阴性符合率和总符合率分别为87.0%、95.1%和92.2%,Kappa系数为0.829,两者一致性较好。结论上海地区克拉霉素耐药Hp菌株基因型以23S rRNA基因的A2143G突变占主导。荧光PCR熔解曲线法可直接检测胃黏膜活检组织中Hp及其23S rRNA突变基因,该方法结果准确可靠。