| pTARGET-TCR Vβ5.2真核表达质粒的构建及表达 |
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| 作者姓名： | 马丽平 李蕴 赵文明 刘振龙 |
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| 作者单位： | 首都医科大学免疫学系,北京,100069;首都医科大学免疫学系,北京,100069;首都医科大学免疫学系,北京,100069;首都医科大学免疫学系,北京,100069 |
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| 基金项目： | 北京市自然科学基金 , 北京市教委科技发展计划项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建含大鼠TCR Vβ5.2基因的重组真核表达质粒.方法 以RT-PCR法扩增Lewis大鼠脾脏淋巴细胞的TCR Vβ5.2基因片段,将目的基因直接克隆到真核表达载体pTARGET中,构建重组质粒pTARGET-TCR Vβ5.2.连接产物转化E.coli JM109细胞后进行蓝白斑筛选,并经菌落PCR和DNA测序进行鉴定.将重组质粒以肌注法免疫Balb/c小鼠,用RT-PCR和免疫组化方法分别检测重组质粒在注射部位的转录和表达.通过脂质体介导,将重组质粒转染COS-7细胞进行瞬时表达,用免疫细胞化学染色法检测目的基因在真核细胞内的表达.结果 测序鉴定证实,TCR Vβ5.2基因已被正确插入到pTARGET载体中,并检测到肌肉组织和COS-7细胞内目的蛋白的表达.结论 成功构建了重组真核表达质粒pTARGET-TCR Vβ5.2,为进行TCR VβDNA疫苗对胶原诱导性关节炎大鼠保护作用的研究提供了基础.
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| 关 键 词： | T细胞受体 真核表达载体 胶原诱导性关节炎 |
| 文章编号： | 1000-8861（2007）01-0097-04 |
| 收稿时间： | 2006-03-23 |
| 修稿时间： | 2006-06-26 |
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