无镁诱导体外培养人胚海马神经元癫痫样放电的实验

目的： 研究体外培养人胚海马神经元的方法以及在换用无镁培养液后神经元产生癫痫样放电的情况，以建立一种人胚海马神经元的癫痫模型。 方法： 取12-20周龄引产的胎儿，分离海马神经元培养，采用NSE鉴定神经元。培养至12 d采用全细胞膜片钳技术记录神经元在无镁液处理不同时间后的放电变化，并应用流式细胞仪检测神经元凋亡的发生。 结果: 形态学上，神经元贴壁后随时间延长突起逐渐增多，神经元突起间互相接触形成网络。体外神经元存活时间约为28 d。无镁液处理后神经元不发生显著的凋亡。电生理学上，神经元经无镁培养液处理0.5 h开始出现癫痫样放电，3 h后产生稳定的放电，持续至恢复正常细胞外液后96 h。 结论: 该方法可用于人胚胎海马神经元的体外培养，经无镁液处理后可以产生反复的自发的惊厥样活动，为今后进一步研究人类癫痫的病理生理机制提供了条件。

Epileptiform discharges induced by zero - Mg2+ in cultured hippocampal neurons of human fetus