重组 GST-β-GT 融合蛋白的原核表达、纯化及活性鉴定 |
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作者姓名: | 郭庆栋 李慎涛 张玉祥 贾弘褆 |
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作者单位: | 1. 首都医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系 2. 首都医科大学基础医学院免疫学系北京,100069 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(81372156);北京市教育委员会科技计划重点项目 |
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摘 要: | 目的:构建噬菌体β‐GT蛋白的原核重组体系,诱导表达、纯化GST‐β‐GT 融合蛋白并对其进行酶活性测定。方法利用PCR技术从T4噬菌体中扩增β‐GT基因;经T‐A克隆,获得β‐GT基因片段,经酶切连接,构建原核表达载体pGEX‐6P‐1‐β‐GT ;经测序鉴定序列正确后,将所构建的载体转化进入大肠埃希菌BL21(DE3)中进行表达。利用IPTG诱导,经10% SDS‐PAGE鉴定目的蛋白表达后,采用GST柱纯化目的蛋白;通过酶切和qPCR鉴定其活性。结果成功扩增了噬菌体β‐GT基因;重组质粒在大肠埃希菌BL21(DE3)中诱导表达出GST‐β‐GT融合蛋白;通过GST柱纯化后获得了GST‐β‐GT融合蛋白,纯度达95%;通过酶切和qPCR验证,此GST‐β‐GT融合蛋白具有T4‐β‐GT酶的活性。结论。原核表达GST‐β‐GT融合蛋白具有糖基转移酶活性。
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关 键 词: | GST-β-GT融合蛋白 核表达载体 蛋白纯化 |
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