| 人E2F1蛋白的表达及与Sedlin蛋白共定位研究 |
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| 引用本文： | 汪燕燕,潘林鑫,王梦媛,刘晓颖,范礼斌.人E2F1蛋白的表达及与Sedlin蛋白共定位研究[J].安徽医科大学学报,2015,50(10):1377-1380. |
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| 作者姓名： | 汪燕燕 潘林鑫 王梦媛 刘晓颖 范礼斌 |
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| 作者单位： | 安徽医科大学生命科学院生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学生命科学院生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学生命科学院生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学生命科学院生物学教研室,合肥,230032;安徽医科大学生命科学院生物学教研室,合肥,230032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金青年基金(81201368)，安徽省级大学生创新创业训练计划项目(AH201410366017 |
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| 摘 要： | 目的 研究人E2F1 蛋白在真核细胞内的表达及其与 Sedlin 蛋白的共定位. 方法 构建 pcDNA3. 1-E2F1-FLAG真核表达质粒,然后瞬时转染至 HEK 293T 细胞内, Western blot法检测E2F1蛋白的表达;瞬时单转E2F1-FLAG和共转E2F1-FLAG+Sedlin-绿色荧光蛋白( GFP)至非洲绿猴肾细胞( COS7 )内,免疫荧光制片,荧光显微镜下观察E2F1-FLAG在细胞内的定位及其和Sedlin的共定位. 结果真核表达质粒 pcDNA3. 1-E2F1-FLAG 构建成功,且在HEK 293T细胞中能够成功表达,在COS7 细胞中主要定位在细胞核,且与Sedlin共定位于细胞核. 结论 人E2F1 在HEK 293T、COS7细胞中都能够正常表达,且与 Sedlin蛋白存在共定位现象,为进一步了解人E2F1的功能及其蛋白质相互作用提供了一定的细胞学基础.
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| 关 键 词： | E2F1 转染 基因表达 细胞定位 |
The expression of human E2F1 and the co-localization with Sedlin |
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| Abstract: | Objective To investigate the expression and localization of E2F1 in eukaryotic cells and the co-locali-zation with Sedlin. Methods To construct eukaryotic expression plasmid pcDNA3. 1-E2F1-FLAG. The plsamid was transfected into HEK 293T cells and the expression was checked by Western blot. Its expression in COS7 cells was detected by fluorescence microscopy. Results The eukaryotic expression plasmid of pcDNA3. 1-E2F1-FLAG was constructed successfully, which could be effectively expressed in HEK 293T and COS7 cells. E2F1 was pre-dominantly distributed in the nucleus, and it co-localized in the nucleus with Sedlin. Conclusion E2F1 can over-express efficiently in HEK 293T and COS7 cells, and it can colocalize with Seldin, which provides important bases for further study on E2F1 including its functions and associated proteins. |
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| Keywords: | E2F1 transfection gene expression cellular localization |
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