| 利用抑制消减杂交技术研究钩端螺旋体致病相关基因 |
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| 引用本文： | 鲍朗,胡昌华,李学敏,晏菊芳,张万江,张会东.利用抑制消减杂交技术研究钩端螺旋体致病相关基因[J].中华微生物学和免疫学杂志,2001,21(5):574-577. |
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| 作者姓名： | 鲍朗 胡昌华 李学敏 晏菊芳 张万江 张会东 |
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| 作者单位： | 华西医科大学感染免疫研究室, |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 (30070670) |
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| 摘 要： | 目的：利用抑制消减杂交技术（SSH），比较致病与非致病钩端螺旋体（简称钩体）之间基因组差异，筛选致病钩体特有的基因片段。方法：以赖型O17株为tester,非致病性patocI株为driver，选择合适的四碱基内切酶将基因组酶切，连接特殊设计的adaptor进行消减杂交和PCR，得到消减混合物，与T／A克隆载体连接，转化JM109建立差异消减文库，经PCR和Southern blot筛选鉴定阳性克隆，进而对部分片段进行测序和同源分析。结果：Alu I适于将钩体酶切成用于SSH技术的小片段；经SSH筛选鉴定得到30个片段大小为200－1300bp的阳性克隆，部分已测序的片段中1个与硫胺素合成蛋白高度同源，4个与GenBank无明显同源性，可能为赖型致病钩体所特有而非致病钩体缺失的基因片段，已被GenBank收录，收录号分别为AF300873－300877。结论：SSH是一种有效、灵敏、高特异的比较分析基因组差异的方法，对钩端螺旋体致病基因的筛选、基因组分化、分子遗传研究等具有重要意义。
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| 关 键 词： | 钩端螺旋体 基因组差异 抑制消减杂交 |
| 修稿时间： | 2000年9月4日 |
Isolation of pathogenicity related genes of Leptospira serovar lai by suppression subtractive hybridization (SSH) |
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| BAO Lang,HU Changhua,LI Xuemin,et al..Isolation of pathogenicity related genes of Leptospira serovar lai by suppression subtractive hybridization (SSH)[J].Chinese Journal of Microbiology and Immunology,2001,21(5):574-577. |
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| Authors: | BAO Lang HU Changhua LI Xuemin |
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| Institution: | BAO Lang,HU Changhua,LI Xuemin,et al. Infection and Immunity Research Unit,West China University of Medical Sciences,Chengdu 610041,P. R. China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Leptospira serovar lai Pathogenicity related gene Suppression subtractive hybridization |
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