| 应用siRNA技术抑制产肠毒素大肠杆菌LT基因表达的研究 |
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| 引用本文： | 付瑞,刘华,段勇,王玉明,单斌.应用siRNA技术抑制产肠毒素大肠杆菌LT基因表达的研究[J].国际检验医学杂志,2015(8). |
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| 作者姓名： | 付瑞 刘华 段勇 王玉明 单斌 |
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| 作者单位： | 昆明医科大学第一附属医院检验科,云南昆明,650032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(81460322)；云南省内设研究机构科技计划项目(2011WS0048)。 |
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| 摘 要： | 目的应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制产肠毒素大肠杆菌(ETEC)LT基因的表达。方法针对LT基因设计siRNAs序列,在ETEC培养过程中,将针对LT的siRNA、非特异性对照siRNA、阴性对照siRNA和LB培养基分别加入siRNA组(siRNA-LT1组、siRNA-LT2组)、siRNA-coa3组、siRNA-NC组和空白对照组,分3个时间点加入,每次1nmol。在首次加入siRNA后45min(A时间点)、90min(B时间点)、135min(C时间点)留取菌液,应用实时荧光定量PCR检测上述3个时间点5组LT mRNA的表达水平。应用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测siRNA-LT1组、siRNA-LT2组和空白对照组在3个时间点的LT蛋白表达水平。结果实时荧光定量PCR结果显示,siRNA-LT1在A、B、C 3个时间点对LT mRNA表达的抑制率分别为70.9%、70.1%、72.5%,siRNA-LT2在A、B、C 3个时间点对LT mRNA表达的抑制率分别为70.1%、69.2%、70.5%,siRNALT1组、siRNA-LT2组对LT mRNA表达的抑制率与相应处理时间的siRNA-NC组、siRNA-coa3组、空白对照组比较差异均有统计学意义(P0.05)。Western Blot结果显示,siRNA-LT1和siRNA-LT2在A、B、C 3个时间点对LT蛋白表达的抑制率分别为43.1%、18.4%、5.0%和38.2%、15.4%、30.1%。结论针对LT基因设计合成的siRNA在体外能有效地抑制LT基因的表达。
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| 关 键 词： | 产肠毒素大肠杆菌 不耐热肠毒素 小干扰RNA技术 RNA干扰 |
The study of using siRNA technology to silence expression of LT gene of Enterotoxigenic Escherichia coli |
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| Fu Rui,Liu Hua,Duan Yong,Wang Yuming,Shan Bin.The study of using siRNA technology to silence expression of LT gene of Enterotoxigenic Escherichia coli[J].International Journal of Laboratory Medicine,2015(8). |
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| Authors: | Fu Rui Liu Hua Duan Yong Wang Yuming Shan Bin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Enterotoxigenic Escherichia coli heat-labile enterotoxin small interfering RNA technology RNA interfer-ence |
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