| 以CDNB为探针测定大鼠肝微粒体中GST活性并优化反应体系 |
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| 引用本文： | 张有金,郭延垒,张艳辉,李文娟,于超. 以CDNB为探针测定大鼠肝微粒体中GST活性并优化反应体系[J]. 华西药学杂志, 2013, 28(3): 259-261 |
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| 作者姓名： | 张有金 郭延垒 张艳辉 李文娟 于超 |
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| 作者单位： | 重庆医科大学生命科学研究院,重庆,400016 |
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| 基金项目： | 国家科技重大专项，重庆科技创新能力建设项目 |
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| 摘 要： | 目的以1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)为探针,优化大鼠肝微粒体中谷胱甘肽硫转移酶(GST)催化反应的条件,为准确测定GST活性提供依据。方法采用Welch Materials Ultimate TM XB C18反相柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为乙腈-水(7∶3),流速0.8 mL.min-1,检测波长238 nm。首先于0.05 mg.mL-1蛋白浓度下,孵育10 min,检测CDNB能否被GST催化发生反应,然后分别在CDNB及CDNB+GSH两种反应条件下,比较不同浓度蛋白、孵育时间、底物浓度的反应差异,选出合理反应条件。结果 CDNB在选定色谱条件下实现了快速分离,且无内源性干扰。CDNB在GST催化下发生了反应;在不同浓度蛋白、孵育时间、底物浓度下,两种反应条件下CDNB反应存在明显差异(P<0.05):CDNB及GSH作为起始条件时反应较少,此外,CDNB反应量与蛋白浓度、孵育时间分别呈线性关系,是优化反应条件的重要依据。结论采用CDNB测定GST活性时,选择合适的CDNB及GSH反应条件能准确地测定GST活性,可用于GST活性测定及相关动力学分析。
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| 关 键 词： | 高效液相色谱法 1-氯-2,4-二硝基苯 大鼠肝微粒体 谷胱甘肽硫转移酶 反应条件 |
The optimization of the determination of the GST enzyme activity in rat liver microsomes with CDNB as probe |
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| ZHANG You-jin,GUO Yan-lei,ZHANG Yan-hui,LI Wen-juan,YU Chao. The optimization of the determination of the GST enzyme activity in rat liver microsomes with CDNB as probe[J]. West China Journal of Pharmaceutical Sciences, 2013, 28(3): 259-261 |
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| Authors: | ZHANG You-jin GUO Yan-lei ZHANG Yan-hui LI Wen-juan YU Chao |
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| Affiliation: | (Institute of Life Sciences,Chongqing Medical University,Chongqing,400016 P.R.China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | HPLC CDNB Rat liver microsomes GST Reaction condition |
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