α受体介导的雌二醇对大鼠结肠平滑肌细胞RhoA/ROCK通路的影响

目的：探讨17β?雌二醇（17β?estraial，E2）对大鼠结肠平滑肌细胞（smooth muscle cell，SMC）RhoA/ROCK通路的影响。方法：体外分离培养Sprague?Dawley（SD）大鼠结肠SMCs。细胞免疫荧光双标法观察ROCK1、雌激素受体（ER)α与α肌动蛋白（α?SMA）共表达。不同浓度和不同时间E2刺激后，以反转录实时荧光定量qRT?PCR、Western blot检测RhoA、ROCK1表达。不同浓度ROCK抑制剂Y27632刺激后，Western blot检测E2对其下游蛋白表达情况。观察ER阻断剂ICI182780、牛血清白蛋白结合的E2（BSA?E2）、ERα激动剂PPT及ERβ激动剂DPN在E2影响RhoA、ROCK1表达的作用。构建ERα、ERβ的siRNA，观察E2刺激对转染后SMC中RhoA、ROCK1表达的影响。结果：细胞免疫荧光示结肠SMC上 ROCK1与α?SMA共表达。50 nmol/L E2刺激24 h可显著抑制大鼠结肠SMC上RhoA、ROCK1表达（P < 0.05）。Y27632可浓度依赖性抑制下游蛋白p?MYPT1、p?CPI17、p?MLC表达。E2组及PPT组RhoA、ROCK1表达显著低于其他各组（P < 0.05）。ERα siRNA组可上调RhoA、ROCK1表达（P < 0.05）。结论：大鼠结肠SMC上存在ROCK1，E2可抑制RhoA/ROCK通路表达，该作用由雌激素α受体介导。