| 摘 要： | 目的探讨中性粒细胞归巢及胞外诱捕网在大鼠呼吸机相关性肺炎（VAP）中的发病机制及针灸治疗作用。 方法将30只Sprague-Dawley大鼠分为对照组、模型组、针灸组、针灸+ CXCR4抑制剂组、针灸+中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）抑制剂组,每组6只。对照组大鼠仅予气管暴露,保留自主呼吸;模型组大鼠麻醉后暴露气管并向气管中注入肺炎克雷伯杆菌;72 h后行经口气管插管接小动物呼吸机,每30分钟行2 ~ 3次大潮气量通气,每天连续通气5 h,持续2 d;针灸组大鼠于造模成功30 min后行针灸治疗;针灸+ CXCR4抑制剂组大鼠于第1天注射菌液前0.5 h按体质量以2.5 mg/kg的剂量腹腔注射CXCR4抑制剂;针灸+ NETs抑制剂组大鼠于机械通气前0.5 ~ 1.0 h按体质量0.8 μM/290 ~ 340 g的剂量鞘内注射NETs抑制剂。采用流式细胞术检测大鼠肺组织中性粒细胞变化趋势,苏木素-伊红（HE）染色观察肺组织病理变化,免疫组织化学染色法检测肺组织瓜氨酸化组蛋白H3（Cit-H3）、髓过氧化物酶（MPO）表达水平。 结果对照组、模型组、针灸组和针灸+ CXCR4抑制剂组大鼠CD11b + CD62L表达水平比较,差异有统计学意义（F = 25.150,P<0.001）。进一步两两比较发现,与对照组比较,模型组CD62L + CD11b表达水平明显升高（P<0.05）;与模型组比较,针灸+ CXCR4抑制剂组表达水平显著下降（P<0.05）。HE染色结果显示,对照组大鼠肺组织未见明显充血、出血、水肿及中性粒细胞浸润;模型组肺组织明显水肿,充血及出血明显,大量炎症细胞浸润;针灸组肺泡及气道黏膜充血、水肿减轻,炎症细胞浸润减少;针灸+ NETs抑制剂组肺泡及气道黏膜充血、水肿明显减轻,炎症细胞浸润明显减少。对照组、模型组、针灸组和针灸+ NETs抑制剂组大鼠肺损伤评分、Cit-H3和MPO表达水平比较,差异均有统计学意义（F = 51.723、227.370、570.097,P均<0.001）。进一步两两比较发现,与对照组比较,模型组Cit-H3、MPO表达水平均显著升高,肺组织炎症浸润更严重（P均<0.05）;与模型组比较,针灸组、针灸+ NETs抑制剂组中Cit-H3、MPO表达水平均显著降低,肺组织炎症浸润明显减轻且针灸+ NETs抑制剂组更为显著（P均<0.05）。 结论VAP大鼠模型中存在中性粒细胞归巢及NETs过度形成的现象;针灸对中性粒细胞归巢的抑制不明显,但可通过调控Cit-H3及MPO的表达抑制NETs的过度形成从而改善炎症反应;同时,针灸联用CXCR4抑制剂可明显改善中性粒细胞归巢,联用NETs抑制剂对NETs的调控效果更为显著,对肺组织炎症反应改善作用更强。
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