表没食子儿茶素没食子酸酯通过减弱HMGB1/TLR4/NF-κB/NLRP3途径改善脓毒症后急性肝损伤

目的　探究表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）在脓毒症后急性肝损伤中的保护作用及潜在机制。方法　采用盲肠结扎穿刺术（CLP）建立脓毒症模型小鼠，以及使用脂多糖建立脓毒症后急性肝损伤细胞模型。8～10周龄雄性C57BL/6J小鼠88只随机分为CLP组、CLP+EGCG低剂量（4 mg/kg）组、CLP+EGCG高剂量（8 mg/kg）组和假手术组。正常肝细胞（L02细胞）根据干预方式不同分为脂多糖（LPS）（400 ng/mL）组、LPS（400 ng/mL）+高迁移率族蛋白B1（HMGB1）（100 ng/mL）组、LPS（400 ng/mL）+EGCG（100 μg/mL）组和对照组（PBS）组。术后24 h，采用全自动生化分析仪检测小鼠肝功能，镜下分析肝组织病理变化；ELISA法检测血清炎症因子；Western blot检测HMGB1、TOLL样受体4（TLR4）、NF-κB p65、NOD样受体蛋白3（NLRP3）、焦亡相关蛋白消皮素D（GSDMD）、caspase 1、caspase 11、IL-1β、IL-18]的水平变化；采用免疫组织化学染色观察小鼠肝组织中HMGB1、GSDMD的表达及定位情况。L02细胞干预24 h后，采用ELISA法检测细胞上清液中炎症因子以及采用Western blot检测细胞中HMGB1、TLR4、NF-κB p65、NLRP3及焦亡相关蛋白的水平变化。结果　动物实验（样本量n=6）表明：CLP组小鼠白细胞计数、淋巴细胞计数、中性粒细胞计数、单核细胞计数均低于假手术组（P均<0.01）。与CLP组相比，CLP+EGCG低剂量、高剂量组小鼠血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、HMGB1、TNF-α、IL-6表达水平明显降低（P均<0.05），且CLP+EGCG高剂量组较低剂量组降低更为明显（P均<0.05）；HE染色结果提示CLP+EGCG低剂量、高剂量组小鼠肝组织损伤明显减轻，且以高剂量组为甚；Western blot提示CLP+EGCG低剂量、高剂量组肝组织中HMGB1、TLR4、NF-κB p65、 NLRP3、焦亡相关蛋白的表达水平明显下降（P均<0.05），且以高剂量组降低更为明显（P均<0.05）；免疫组化提示CLP+EGCG低剂量、高剂量组中HMGB1和GSDMD的表达明显减少（P均<0.05），且CLP+EGCG高剂量组降低更为明显（P均<0.05）。细胞实验（样本量n=8）表明：与LPS+HMGB1组相比，LPS组、LPS+EGCG组以及对照组的细胞上清液中HMGB1、TNF-α和IL-6的表达水平明显减少（P均<0.05）,且LPS+EGCG组较LPS组明显降低（P均<0.05）。Western blot结果提示LPS+HMGB1组中HMGB1、TLR4、NF-κB p65、 NLRP3以及焦亡相关蛋白表达水平较其余三组明显升高（P均<0.05），且LPS+EGCG组较LPS组明显降低（P均<0.05）。结论　EGCG对脓毒症后急性肝损伤有保护作用，其机制可能与通过减弱HMGB1/TLR 4/NF-κB P65/NLRP3途径降低肝细胞焦亡有关。