人血清淀粉样蛋白P的分离,纯化及抗血清的制备

目的分离、纯化人血清淀粉样蛋白Ｐ（ＳｅｒｕｍａｍｙｌｏｉｄＰ，ＳＡＰ）；利用新西兰大白兔制备抗血清。方法新鲜人血清２００ｍｌ与等体积４％琼脂糖凝胶（Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ）混合，在钙离子存在条件下分离ＳＡＰ，然后用二乙基氨基乙基琼脂糖凝胶ＣＬ—６Ｂ（ＤＥＡＥ—ＳｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ－６Ｂ）离子交换层析技术进一步纯化ＳＡＰ，用火箭电泳检测ＳＡＰ组分，用十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（Ｓｏｄｉｕｍｄｏｄｅｃｙｌｓｕｌｆａｔｅ－Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ，ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）检测其纯度，经Ａ２８０（１％）＝１８２测定其含量。用纯化的ＳＡＰ与完全佐氏试剂混合注射于新西兰大白兔背部皮内，每次１００μｇ，间隔１０天，连续３次，第四次２００μｇ，ＳＡＰ总用量为５００μｇ，１０天后取血制备抗血清。结果从２００ｍｌ人血清中提取纯品２４ｍｇ，产率约４０％。抗血清经双向扩散法测定效价为１：１６。结论该改良法，操作简便，节省时间，但ＳＡＰ产率并不低。