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| SV40T抗原胃壁细胞特异性表达载体的构建与鉴定 | |
| 引用本文： | 陈辉,侯艺芳,乐晓平,金辉,马慧洁,张钦宪.SV40T抗原胃壁细胞特异性表达载体的构建与鉴定[J].世界华人消化杂志,2007,15(18):2004-2008. |
| 作者姓名： | 陈辉 侯艺芳 乐晓平 金辉 马慧洁 张钦宪 |
| 作者单位： | 1. 郑州大学基础医学院细胞生物学与医学遗传学教研室,河南省分子医学重点实验室,河南省郑州市,450052 2. 郑州大学第一附属医院妇产科,河南省郑州市,450052 3. 郑州大学基础医学院组织胚胎学教研室,河南省郑州市,450052 |
| 基金项目： | 河南省重大科技攻关计划资助项目，No．0623031400~~ |
| 摘 要： | 目的:构建在胃壁细胞中特异性表达SV40T抗原的真核表达裁体并进行鉴定.方法:采用酚-氯仿法从昆明小鼠肝细胞中提取基因组DNA,聚合酶链式反应(PCR)扩增H~ /K~ ATPaseβ亚基启动子,产物命名为HK.将PCR产物纯化回收后与pMT18-T载体相连,并将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(-),构建pcDNA3.1(-)/HK;从含SV40T基因片段的质粒p LITAg中酶切回收SV40T基因,与pcDNA3.1(-)/HK相连,构建胃壁细胞特异性表达载体pcDNA3.1(-)/HKSV,并测序鉴定.结果:pcDNA3.1(-)/HKSV用XbaⅠ、BarnHⅠ双酶切可得到1kb H~ /K~ ATPaseβ亚基启动子,2.7 kb SV40T基因与5.4 kb pcDNA3.1(-)载体3条DNA条带.用XbaⅠ、KpnⅠ双酶切电泳,可见到约3.7与5.4 kb的两条DNA条带;用BamHⅠ单酶切电泳,可见到2.7与6.4 kb的2条DNA条带;用EcoRⅠ单酶切,只见到约9.1 kb的1条DNA条带,酶切电泳结果均与设计一致.测序结果显示,H~ /K~ ATPaseβ亚基启动子与SV40T基因成功构建于pcDNA3.1(-)真核表达载体中.结论:构建在胃壁细胞中特异性表达SV40T基因的真核表达载体,为进一步转基因小鼠及胃癌动物模型的建立提供了稳定、可靠的分子工具. |
| 关 键 词： | SV40病毒 T抗原 真核表达 载体构建 |
| 收稿时间： | 2007-01-11 |
| 修稿时间： | 2007年1月11日 |
Construction and identification of a specific expression vector for SV40 large T antigen in gastric parietal cell |
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| Hui Chen,Yi-Fang Hou,Xiao-Ping Le,Hui Jin,Hui-Jie Ma,Qin-Xian Zhang.Construction and identification of a specific expression vector for SV40 large T antigen in gastric parietal cell[J].World Chinese Journal of Digestology,2007,15(18):2004-2008. | |
| Authors: | Hui Chen Yi-Fang Hou Xiao-Ping Le Hui Jin Hui-Jie Ma Qin-Xian Zhang |
| Abstract: | |
| Keywords: | SV40 virus T antigen Eukaryotic expression Vector construction |
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