| 肺表面活性物质相关蛋白C真核表达载体的构建及体外表达 |
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| 引用本文： | 崔晓光,谭晶,李成儒,李文志.肺表面活性物质相关蛋白C真核表达载体的构建及体外表达[J].中国危重病急救医学,2010,22(7). |
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| 作者姓名： | 崔晓光 谭晶 李成儒 李文志 |
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| 作者单位： | 哈尔滨医科大学附属第二医院麻醉科,黑龙江省麻醉与危重病学研究重点实验室,黑龙江,150086 |
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| 基金项目： | 哈尔滨医科大学重点科技项目 |
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| 摘 要： | 目的 克隆人肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)基因,构建真核表达载体pcDNA3.1(+)/SP-C,并检测其在体外的表达,为SP-C的批量生产提供可靠的方法.方法 提取肺癌手术患者病灶周围正常肺组织总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术获得SP-C cDNA序列.用NotI和XhoI内切酶双酶切SP-C cDNA序列和质粒pcDNA3.1(+),胶回收后体外连接.酶切和测序后,用脂质体包裹转染人乳腺癌细胞株MCF-7,采用RT-PCR和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测SP-C的表达.结果 能够正确克隆人SP-C基因并插入至质粒pcDNA3.1(+)中;重组质粒体外转染MCF-7细胞后可以表达SP-C蛋白.结论 采用体外重组技术,成功构建了人SP-C真核表达载体 pcDNA3.1(+)/SP-C,并能在体外表达SP-C,为下一步构建人SP-C乳腺特异表达载体,利用乳腺生物反应器大量生产SP-C奠定了基础.
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| 关 键 词： | 肺表面活性物质相关蛋白C 真核表达载体 克隆 转染 MCF-7细胞 |
Construction of eukaryote expression vector carrying human pulmonary surfactant-associated protein C and its expression in vitro |
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| CUI Xiao-guang,TAN Jing,LI Cheng-ru,LI Wen-zhi.Construction of eukaryote expression vector carrying human pulmonary surfactant-associated protein C and its expression in vitro[J].Chinese Critical Care Medicine,2010,22(7). |
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| Authors: | CUI Xiao-guang TAN Jing LI Cheng-ru LI Wen-zhi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pulmonary surfactant-associated protein C Eukaryote expression vector Cloning Transfection MCF-7 cell |
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