| 复制型HBV重组腺病毒的制备 |
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| 引用本文： | 尹华,周陶友,李红,王月宾,韩红霞,唐红. 复制型HBV重组腺病毒的制备[J]. 四川医学, 2008, 29(5): 500-503 |
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| 作者姓名： | 尹华 周陶友 李红 王月宾 韩红霞 唐红 |
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| 作者单位： | 四川大学华西医院感染性疾病中心,四川,成都,610041;四川大学华西医院感染性疾病中心,四川,成都,610041;四川大学华西医院感染性疾病中心,四川,成都,610041;四川大学华西医院感染性疾病中心,四川,成都,610041;四川大学华西医院感染性疾病中心,四川,成都,610041;四川大学华西医院感染性疾病中心,四川,成都,610041 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 , 国家重点基础研究发展计划(973计划) |
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| 摘 要： | 目的 通过细茼体内同源重组方法,构建含1.3拷贝HBV DNA片段(HBV4.1)的HBV复制型重组腺病毒.方法 从质粒pTh-HBV4.1上获取HBV4.1片段,插入腺病毒穿梭质粒载体pAdTrack-CMV中,构建含HBV4.1的重组穿梭质粒pAdTrack-CMV/HBV4.1.然后在大肠杆菌BJ5183内与pAdEasy-1进行同源重组,形成重组腺病毒质粒pAd-GFP/HBV4.1,经脂质体2000转染HEK293细胞进行包装和扩增,获得腺病毒Ad-CFP/HBV4.1.通过荧光显微镜下观察GFP绿色荧光蛋白的表达,检测腺病毒滴度和感染效率;采用PCR法检测腺病毒DNA上有无HBV基因组存在.结果 经酶切鉴定确认含HBV穿梭质粒pAdTrack-CMV/HBV4.1和重组腺病毒基因组质粒pad-GFP/HBV4.1构建成功;GFP荧光检测提示重组腺病毒Ad-GFP/HBV4.1已成功包装;PCR扩增表明重组腺病毒内携带有HBV DNA片段.在HEK293细胞中获得的病毒滴度可达(4.2～4.8)×107 efu/ml;当MOI为100时,感染HEK293细胞的效率>90%.结论 成功构建了携带1.3拷贝HBV基因组的重组腺病毒Ad-GFP/HBV4.1,为进一步建立高水平HBV复制型细胞和动物模型以用于HBV生物学特性的研究英定了基础.
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| 关 键 词： | AdEasy系统 腺病毒 乙肝病毒 同源重组 细菌 |
Construction of recombinant adenovirus with replicative HBV genome |
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