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| 狂犬病毒核蛋白单抗和荧光抗体中和试验的建立与应用 | |
| 引用本文： | 张守峰,曹亮,张菲,李海涛,李清竹,扈荣良. 狂犬病毒核蛋白单抗和荧光抗体中和试验的建立与应用[J]. 中华检验医学杂志, 2006, 29(6): 554-557 |
| 作者姓名： | 张守峰 曹亮 张菲 李海涛 李清竹 扈荣良 |
| 作者单位： | 1. 130062,长春,军事医学科学院军事兽医研究所 2. 新疆农业大学动物医学院 3. 沈阳农业大学畜牧兽医学院 |
| 基金项目： | 国家“863”计划高技术发展基金资助项目（2004AA213101）;志谢 本试验的样品标定和部分检测工作承蒙英国威桥（Weybridge）狂犬病参考实验室大力协助 |
| 摘 要： | 目的建立狂犬病毒血清中和抗体效价的快速检测方法，以实现狂犬疫苗免疫效果的定量评价，指导高危人群及动物种群的免疫预防。方法采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗狂犬病毒核蛋白单抗，以亲和层析法进行纯化，异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体；以BHK-21细胞系培养狂犬病毒细胞适应株CVS-11，以染毒细胞测定荧光抗体的工作浓度后，通过荧光抗体染色法测定CVS-11细胞半数感染量（TCID50）；利用狂犬病毒灭活疫苗免疫犬制备抗狂犬病毒血清，并以国际兽疫局标准品进行标定；参考世界卫生组织及国际兽疫局推荐方法，确定中和试验程序，对51份样品血清进行测定，并与国际狂犬病参考实验室的检测结果进行比较，评价其精确及可靠程度。以Kaber法公式和Microsoft Excel软件为基础，设计被测样品中和效价计算方法。结果制备的抗狂犬病毒核蛋白单抗的亚型为IgG2a；纯化、标记后的荧光抗体工作浓度为1：400；CVS-11株的使用量为每孔100 TCID50；本研究建立的检测程序对51份人及犬血清测得的中和效价结果与国际参考实验室的测定结果一致；自行设计的计算方法操作简便，计算快捷。结论成功建立了与国际标准相当的狂犬病毒中和抗体效价测定和计算方法。 |
| 关 键 词： | 狂犬病毒 杂交瘤 荧光抗体技术 中和试验 |
| 收稿时间： | 2005-12-05 |
| 修稿时间： | 2005-12-05 |
Establishment and application of hybridomas producing anti-rabies nucleoprotein McAb and fluorescent antibody virus neutralization test |
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| ZHANG Shou-feng,CAO Liang,ZHANG Fei,LI Hai-tao,LI Qing-zhu,HU Rong-liang. Establishment and application of hybridomas producing anti-rabies nucleoprotein McAb and fluorescent antibody virus neutralization test[J]. Chinese Journal of Laboratory Medicine, 2006, 29(6): 554-557 | |
| Authors: | ZHANG Shou-feng CAO Liang ZHANG Fei LI Hai-tao LI Qing-zhu HU Rong-liang |
| Affiliation: | Military Veterinary Institute, Academy of Military Medical Sciences, PLA, Changchun 130062, China |
| Abstract: | |
| Keywords: | Rabies virus Hybridomas Fluorescent antibody technique Neutraliration tests |
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