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| 藜草花粉变应原λ噬菌体cDNA表达文库的构建及初步鉴定 | |
| 引用本文： | 张洁,孙秀珍,颜虹,张妮,冯向莉.藜草花粉变应原λ噬菌体cDNA表达文库的构建及初步鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2011,27(5). |
| 作者姓名： | 张洁 孙秀珍 颜虹 张妮 冯向莉 |
| 作者单位： | 1. 西安交通大学医学院第二附属医院呼吸内科,陕西,西安,710004 2. 西安交通大学医学院公共卫生系,陕西,西安,710004 3. 西安交通大学医学院第二附属医院康复医学科,陕西,西安,710004 |
| 基金项目： | 卫生部临床学科重点项目 |
| 摘 要： | 目的:构建藜草花粉变应原λ噬菌体cDNA表达文库,并进行初步鉴定.方法:用TRIzol试剂抽提藜草花粉总RNA并分离mRNA.以纯化的mRNA为模板,以含有Xho I内切酶位点和18 by的Poly(dT)序列的引物,用ZAP Express cDNA合成试剂盒反转录合成cDNA.将cDNA修饰、分级纯化后,获得大于400 by的cDNA片段.将带有黏性末端的双链ds cD-NA与Uni-ZAP XR载体连接,采用ZAP Express cDNA文库合成试剂盒利用λ噬菌体构建藜草花粉λ噬菌体cDNA表达文库,用包装蛋白对合成的ds cDNA进行体外包装,以包装产物感染宿主菌XL1-Blue MRF即获得cDNA表达文库.用PCR方法检测cDNA表达文库的滴度和插人片段的大小.结果:构建的藜草花粉变应原λ噬菌体表达文库的滴度为9.7×10(8)pfu/L,重组率为100%,库容量为4.85pfu.插人片段的长度平均约为1.0 kb.结论:构建的cDNA表达文库的容量及插人片段的大小合适,适用于藜草花粉变应原cDNA克隆的筛选,为制备基因重组藜草花粉变应原疫苗奠定了基础. |
| 关 键 词： | 藜草花粉 表达文库 |
Construction and identification of the expression library of album pollen allergens cDNA |
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| ZHANG Jie,SUN Xiu-zhen,YAN Hong,ZHANG Ni,FENG Xiang-li.Construction and identification of the expression library of album pollen allergens cDNA[J].Journal of Cellular and Molecular Immunology,2011,27(5). | |
| Authors: | ZHANG Jie SUN Xiu-zhen YAN Hong ZHANG Ni FENG Xiang-li |
| Institution: | ZHANG Jie1,SUN Xiu-zhen1,YAN Hong2,ZHANG Ni3,FENG Xiang-li1 1Department of Respiration,3Department of Rehabilitation Medicine,Second Affiliated Hospital of Medical College,Xi'an Jiaotong University,Xi'an 710004,2Department of Public Health of Medical College,Xi'an 710061,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | cDNA |
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