| 一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达 |
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| 引用本文： | 吴凯峰,张薇薇,崔亚利,张雪梅,胥文春,庞丹,刘鑫,王虹.一种减毒肺炎链球菌溶血素突变体的构建与表达[J].医学分子生物学杂志,2010,7(5). |
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| 作者姓名： | 吴凯峰 张薇薇 崔亚利 张雪梅 胥文春 庞丹 刘鑫 王虹 |
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| 作者单位： | 1. 重庆医科大学医学临床检验诊断学教育部重点实验室,重庆市,400016
2. 上海市浦东新区宣桥社区卫生服务中心防保科,上海市,201314 |
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| 基金项目： | 重庆市科委自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的 使用重叠PCR方法构建构建△A146Ply突变体,原核可溶性表达△A146Ply蛋白,并明确其毒力变化情况;分析肺炎链球菌溶血素(pneumolysin,Ply)在不同血清型肺炎链球菌(streptococcus pneumoniae,SPN)中的表达情况.方法 以SPN D39型基因组DNA为模板设计合成构建突变体ply基因所需引物;利用重叠PCR方法扩增合成△A146ply突变体.通过溶血实验分析其溶血活性,利用中和试验验证△A146Ply诱导产生的特异性抗体中和野生Ply毒素溶血能力,并利用Western印迹检测5株不同血清型肺炎链球菌流行菌株中Ply蛋白表达情况.结果 突变体基因测序结果显示,Ply146位密码子GCT 3个碱基被缺失,△A146ply突变体构建成功,并实现了△A146Ply的可溶性表达,得到纯度＞90 %的重组蛋白.△A146Ply蛋白浓度为100 000 ng/ml亦未表现出溶血活性.△A146Ply蛋白诱导产生的特异性抗体能够中和野生Ply毒素的溶血活性.Western印迹结果显示,△A146Ply诱导产生的多克隆抗体可与国内临床常见4株肺炎链球菌有交叉反应.结论 △A146Ply蛋白是一种安全的肺炎链球菌疫苗候选分子,可刺激机体产生具有中和作用的特异性抗体.
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| 关 键 词： | 肺炎链球菌 溶血素 重叠PCR 突变体 |
Construction and Over-expression of A Pneumolysin Mutant Derived from Streptococcus Pneumoniae D39 |
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| WU Kaifeng,ZHANG Weiwei,CUI Yali,ZHANG Xuemei,XU Wenchun,PANG Dan,LIU Xin,WANG Hong.Construction and Over-expression of A Pneumolysin Mutant Derived from Streptococcus Pneumoniae D39[J].Journal of Medical Molecular Biology,2010,7(5). |
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| Authors: | WU Kaifeng ZHANG Weiwei CUI Yali ZHANG Xuemei XU Wenchun PANG Dan LIU Xin WANG Hong |
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