| 超抗原SEA(D227A)的构建及其免疫活性鉴定 |
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| 引用本文： | 宋宏萍,隋延仿,叶菁,李增山,陈广生,张秀敏. 超抗原SEA(D227A)的构建及其免疫活性鉴定[J]. 免疫学杂志, 2004, 20(5): 357-360 |
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| 作者姓名： | 宋宏萍 隋延仿 叶菁 李增山 陈广生 张秀敏 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710032;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710032;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710032;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710032;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710032;第四军医大学基础部病理学教研室,陕西,西安,710032 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (39770 82 7)，全军医药卫生科研基金 (0 1Z0 84)重点资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 构建SEA(D227A)基因的原核表达载体，并进行表达、分离纯化与免疫活性鉴定。方法 采用PCR技术从产SEA的葡萄球菌标准株中克隆SEA基因，通过下游引物上的点突变，使SEA基因第680位碱基由A突变为C，致使SEA成熟蛋白的第227位氨基酸残基由天冬氨酸(GAT)突变为丙氨酸(GCr)，构建pGEX-SEA(D227A)重组表达质粒，在大肠杆菌DHSa中原核表达，再通过淋巴细胞增殖实验对其免疫活性进行测定。结果 构建的SEA(D227A)基因经测序证实与设计的序列一致；成功地构建pGDX-SEA(D227A)重组表达质粒，转化感受态大肠杆菌DH5α，通过IPTG诱导、GSTrap FF柱分离纯化及凝血酶切除CST后，得到Mr为27000的目的蛋白。淋巴细胞增殖实验显示，100ng/mL重组SEA(D227A)可明显刺激淋巴细胞增殖。结论 成功地构建了SEA(D227A)基因原核表达载体，并在大肠杆菌中得到高效表达，所得重组SEA(D227A)能够刺激淋巴细胞增殖，但作用与野生型SEA相比较温和。该结果为寻找有效、毒副作用低的超抗原提供了线索。
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| 关 键 词： | 葡萄球菌肠毒素A 超抗原 原核表达 点突变 |
| 文章编号： | 1000-8861(2004)05-0357-04 |
| 修稿时间： | 2003-12-16 |
Construction of superantigen SEA (D227A) and its immunological identification |
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| SONG Hong-ping,SUI Yan-fang,YE Jing,LI Zeng-shan,CHEN Guang-sheng,ZHANG Xiu-min. Construction of superantigen SEA (D227A) and its immunological identification[J]. Immunological Journal, 2004, 20(5): 357-360 |
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| Authors: | SONG Hong-ping SUI Yan-fang YE Jing LI Zeng-shan CHEN Guang-sheng ZHANG Xiu-min |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | SEA Superantigen Prokaryotic expression Mutant |
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