| 摘 要： | 目的探讨负载IL-4和BMP-2的氧化石墨烯(graphene oxide,GO)-羧甲基壳聚糖(carboxymethyl chitosan,CMC)凝胶诱导巨噬细胞M2型分化及对BMSCs成骨分化的影响。方法取CMC、GO制备混合溶液后,分别添加PBS、IL-4、BMP-2或IL-4+BMP-2,在交联剂作用下制备单纯或负载不同因子的GO-CMC凝胶支架;取单纯GO-CMC凝胶表征观测,包括大体、扫描电镜及傅里叶变换红外吸收光谱仪(Fourier transform infrared spectroscopy,FTIR)检测,以单纯CMC凝胶作为对照;取负载不同因子的GO-CMC凝胶行体外缓释实验。取4～5周龄SPF级SD雌性大鼠分离培养巨噬细胞,分别与单纯以及负载不同因子的GO-CMC凝胶培养,24 h后行CD206免疫荧光检测巨噬细胞分化情况;取第3代大鼠BMSCs分别与单纯以及负载不同因子的GO-CMC凝胶成骨诱导培养,10 d后行ALP染色观测早期成骨,21 d行茜素红染色观测晚期成骨。结果大体观察GO-CMC凝胶呈棕色、半透明状;扫描电镜观察示,GO-CMC凝胶孔径及孔壁厚度与单纯CMC凝胶相似,但内壁粗糙度增加;FTIR检测显示CMC发生聚合形成凝胶。体外缓释实验示3种负载不同因子的GO-CMC凝胶缓释性能相似,均呈线性缓慢释放因子。CD206免疫荧光检测示GO-CMC凝胶可诱导巨噬细胞M2型分化,ALP及茜素红染色示GO-CMC凝胶可诱导BMSCs成骨分化;其中负载IL-4+BMP-2的GO-CMC凝胶作用最显著(P0.05)。结论负载IL-4和BMP-2的GO-CMC凝胶可诱导巨噬细胞M2型分化,增强BMSCs成骨分化能力,为后期骨缺损修复及骨免疫调节研究提供了新的策略。
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