| 人AMPKα2基因pEGFP-N1-AMPKα2表达载体的构建和鉴定 |
| |
| 引用本文： | 卢俊,徐世元,崔睿,张庆国,雷洪伊.人AMPKα2基因pEGFP-N1-AMPKα2表达载体的构建和鉴定[J].基础医学与临床,2011,31(2). |
| |
| 作者姓名： | 卢俊 徐世元 崔睿 张庆国 雷洪伊 |
| |
| 作者单位： | 南方医科大学,珠江医院,麻醉科,广东,广州,510282 |
| |
| 摘 要： | 目的 构建表达人单磷酸腺苷激活的蛋白激酶催化亚单位α2(AMPKα2)基因的pEGFP-N1-AMPKα2载体,转染SH-SY5Y细胞系,观测其上调AMPKα2基因的效果.方法 PCR法扩增AMPKα2基因片段,克隆到pEGFP-N1质粒载体上.对重组质粒进行DNA序列测定和酶切分析.用质脂体将重组质粒pEGFP-N1-AMPKα2转染到SH-SY5Y细胞系,经G418筛选阳性克隆后,用RT-PCR和Western blot法检测AMPKα2的mRNA和蛋白表达.流式细胞仪检测转染重组质粒细胞内ROS变化.结果 经DNA测序和酶切鉴定表明,pEGFP-N1-AMPKα2表达载体构建成功.重组质粒pEGFP-N1-AMPKα2转染SH-SY5Y细胞系后,细胞中AMPKα2蛋白表达量明显增高.SH-SY5Y细胞转染pEGFP-N1-AMPKα2后,ROS含量增多.结论 成功构建了人AMPKα2基因的pEGFP-N1-AMPKα2表达载体.pEGFP-N1-AMPKα2能有效上调AMPKα2基因在SH-SY5Y细胞系中的表达,为将来应用其研究AMPK在局麻药致细胞损伤中的作用奠定了基础.
|
| 关 键 词： | 局麻药 活性氧 单磷酸腺苷激活的蛋白激酶 |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
