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| 结核分枝杆菌H37Rv两种抗原Ag85b、HspX的制备及其与佐剂的联合应用 | |
| 引用本文： | 陈磊,徐苗,都伟欣,陈保文,王志玉,王雅君,董娜,苏城,沈小兵,王国治.结核分枝杆菌H37Rv两种抗原Ag85b、HspX的制备及其与佐剂的联合应用[J].中国医学科学院学报,2009,31(4). |
| 作者姓名： | 陈磊 徐苗 都伟欣 陈保文 王志玉 王雅君 董娜 苏城 沈小兵 王国治 |
| 作者单位： | 1. 山东大学,公共卫生学院病毒学研究室,济南,250012 2. 中国药品生物制品检定所细菌一室,北京,100050 3. 中国医学科学院,北京协和医学院,实验动物研究所,北京,100021 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划项目(863项目) |
| 摘 要： | 目的 用分子生物学方法制备H37Rv的两种抗原Ag85b、HspX,通过与铝佐剂和CpG佐剂联用免疫小鼠进行初步药理学实验以观察其生物学活性.方法 常规方法分别构建重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,内切酶鉴定目的 片段后两种质粒分别转化BL-21大肠杆菌,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷诱导后分别产生两种蛋白;用阴离子交换柱Source30、QHP以及疏水层析柱对两种蛋白进行纯化;蛋白测序进行鉴定.纯化后的两种蛋白分别与铝佐剂和CpG佐剂联用(Ag85b,Ag85b+Al,Ag85b+CpG,Ag85b+Al+CpG;HspX,HspX+Al,HspX+CpG,HspX+Al+CpG),免疫C57/BL小鼠,同时设置生理盐水对照组,取脾细胞进行酶联免疫斑点实验(ELISPOT)检测干扰素-γ(IFN-γ)的分泌;同时进行淋巴细胞增殖实验检测脾淋巴细胞经体外刺激后的增殖情况.结果 成功构建了两种重组表达质粒pET30a-Ag85b和pET30a-HspX,成功诱导表达了两种蛋白;经过纯化,两种蛋白纯度均达到95%;经鉴定两种蛋白纯化产物的N端15个氨基酸序列与目的序列相同;Ag85b+CpG、Ag85b+Al和Ag85b+CpG+Al组经Ag85b(80 μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05);HspX+CpG+Al组经HspX(80μg/ml)体外刺激后分泌IFN-γ显著升高,与生理盐水组比较差异具有显著性(P<0.05).结论 成功表达并纯化了结核分枝杆菌H37Rv的两种抗原Ag85b和HspX,与铝佐剂和CpG佐剂联用后成功刺激小鼠产生了细胞免疫反应,证实了两种重组蛋白的生物学活性,为下一步药效学评估奠定了基础. |
| 关 键 词： | 结核分枝杆菌 重组蛋白质 佐剂 |
Preparation of Two Antigens - Ag85b and HspX of Mycobacterium Tuberculosis H37Rv and the Effects of Their Co-administration with Adjuvants in Mice |
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| CHEN Lei,XU Miao,DU Wei-xin,CHEN Bao-wen,WANG Zhi-yu,WANG Ya-jun,DONG Na,SU Cheng,SHEN Xiao-bing,WANG Guo-zhi.Preparation of Two Antigens - Ag85b and HspX of Mycobacterium Tuberculosis H37Rv and the Effects of Their Co-administration with Adjuvants in Mice[J].Acta Academiae Medicinae Sinicae,2009,31(4). | |
| Authors: | CHEN Lei XU Miao DU Wei-xin CHEN Bao-wen WANG Zhi-yu WANG Ya-jun DONG Na SU Cheng SHEN Xiao-bing WANG Guo-zhi |
| Abstract: | |
| Keywords: | Ag85b HspX |
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