沉默HDAC6对嗜肺军团菌干扰RAW264.7自噬作用的影响

目的 以嗜肺军团菌感染HDAC6基因沉默的RAW264.7细胞为研究对象，检测自噬流及自噬相关因子表达水平的变化，探究HDAC6在嗜肺军团菌干扰巨噬细胞自噬中的作用机制。方法 利用RNAi技术介导基因沉默，构建shRNAHDAC6细胞，Western blot验证沉默效果。用嗜肺军团菌活菌和灭活菌感染复数(MOI)=50]分别感染RAW264.7、sh-NC、shRNA-HDAC6细胞6、12、24 h。应用自噬双标质粒pmCherry-C1-EGFP-LC3B检测巨噬细胞自噬流的变化；透射电镜观察嗜肺军团菌感染24 h后各组细胞内的自噬小体和自噬溶酶体；实时荧光定量PCR及Western blot法检测AMBRA1、ATG9B、P62、Beclin1、α-tubulin、LC3B的表达水平。结果 与RAW264.7对照组相比，shRNA-HDAC6细胞的HDAC6蛋白表达水平显著降低(P<0.05)；自噬双标质粒检测自噬流结果显示，嗜肺军团菌活菌及灭活菌感染RAW264.7细胞，自噬流均减弱，沉默HDAC6后嗜肺军团菌感染巨噬细胞自噬流增加。透射电镜可观察到嗜肺军团菌感染巨噬...