转染血管紧张素Ⅰ骨髓间充质干细胞复合胶原构建组织工程皮肤修复烫伤后的创面

背景：组织工程皮肤作为可行的皮肤替代物，近年来已成为研究和开发的热点，为烧伤、皮肤溃疡等病变的创面治疗提供了新的解决途径。目的：观察转染血管紧张素Ⅰ基因的骨髓间充质干细胞复合胶原构建的组织工程皮肤对烫伤后创面的修复及促血管形成作用。设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2008-03/11在中山大学第一附属医院实验动物中心完成。材料：鼠龄4周的雄性SD大鼠45只，体质量120~150 g，用于制备烫伤模型；牛Ⅰ型胶原为美国Sigma公司产品。方法：脂质体介导质粒pEGFP-N1-hAng-Ⅰ转染大鼠骨髓间充质干细胞，转染后与牛Ⅰ型胶原复合，体外构建组织工程皮肤，修复大鼠烫伤模型创面。45只SD大鼠按随机抽签法分为3组：血管紧张素Ⅰ/胶原移植组、骨髓间充质干细胞/胶原移植组和空白对照组，每组15只。在烫伤创面分别植入复合骨髓间充质干细胞/转血管紧张素Ⅰ的组织工程皮肤、单纯骨髓间充质干细胞复合的组织工程皮肤。空白对照组不移植任何组织和细胞，其他处理与实验组相同。主要观察指标：分别在移植后3，7，14，28 d取材，以扫描电镜、组织学、免疫组织化学分析等方法检测构建的组织工程皮肤结构、创面修复及血管再生情况。结果：pEGFP-N1-hAng-Ⅰ在阳离子脂质体的作用下，成功地进入大鼠骨髓间充质干细胞，转录出相应mRNA。蛋白免疫印迹分析显示转染细胞有与目的基因相对分子质量相符的血管紧张素Ⅰ抗体结合蛋白印迹条带。实验所构建的组织工程皮肤结构完整，细胞状态良好。血管紧张素Ⅰ/胶原移植组、骨髓间充质干细胞/胶原移植组和空白对照组创面的愈合时间分别为(12.6±1.9)，(15.4±2.3)，(26.4±3.6) d，P < 0.05。组织学检查见转染细胞组毛细血管生长及新形成活跃，移植后7，14，28 d骨髓间充质干细胞/胶原移植组和血管紧张素Ⅰ/胶原移植组微血管密度分别为(22.8±1.4)，(34.3±2.6)，(57.4±6.1)条/mm2；(38.2±3.4)，(53.2±5.8)，(74.2±6.9)条/mm2，P < 0.05。结论：血管紧张素Ⅰ转染细胞组较对照组血供加强，创面修复加速，与细胞因子局部定向释放，加强血管形成有关。