不同型别登革病毒融合外膜基因重组腺病毒的构建及表达 |
| |
引用本文: | 张志珊,严延生,翁育伟,何似.不同型别登革病毒融合外膜基因重组腺病毒的构建及表达[J].中国人兽共患病杂志,2008,24(9):836-840. |
| |
作者姓名: | 张志珊 严延生 翁育伟 何似 |
| |
作者单位: | 福建医科大学附属泉州第一医院检验科;福建省疾病预防控制中心; |
| |
摘 要: | 目的构建登革病毒1型和2型外膜蛋白(E蛋白)DⅢ区融合基因的重组腺病毒,在BHK-21细胞中表达。方法用PCR法扩增登革病毒1型和2型EDⅢ基因,依次克隆入pCDNA3.1(+),构建重组质粒pCDNA-D1/D2EDⅢ。以此为模板,扩增包含CMV启动子-D1/D2EDⅢ-BGHpA的表达片段,与pENTR4载体连接形成质粒pENTR4-D1/D2EDⅢ,与pAd/PL-DEST进行体外同源重组,形成重组腺病毒载体pAd-D1/D2EDⅢ,在293A细胞系中包装成具有感染性的重组腺病毒,进一步感染BHK-21细胞,用间接免疫荧光法和Westernblot法检测重组蛋白在细胞中的表达情况。结果重组腺病毒构建成功,转染293A细胞后获得2×109pfu/mL滴度的重组腺病毒,感染哺乳动物细胞后能够表达1型和2型EDⅢ区目的蛋白。结论不同型别融合基因的重组腺病毒表达载体能有效地表达相应型别的目的蛋白,为进一步构建单一的四价重组腺病毒应用于登革疫苗研究奠定基础。
|
关 键 词: | 登革病毒 外膜蛋白 DⅢ区 腺病毒载体 |
收稿时间: | 2008-09-20 |
本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录! |
| 点击此处可从《中国人兽共患病杂志》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《中国人兽共患病杂志》下载免费的PDF全文 |
|