降钙素基因相关肽诱导脂肪干细胞向成骨细胞的分化

背景：已证实降钙素基因相关肽可促进成骨细胞的增殖与分化，并加速骨折的愈合、促进异位骨化的形成，但其是否具有促使脂肪干细胞向成骨细胞定向分化的作用作者未查到相关报道。 目的：探讨降钙素基因相关肽在体外定向诱导脂肪干细胞向成骨细胞增殖分化的可行性。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，基因及蛋白质学检测，于2006-10/2007-08在武汉大学医学院中心实验室和三峡大学医学院病理实验室完成。 材料：清洁级4月龄健康新西兰大耳白兔2只。 方法：密度梯度离心+贴壁法体外分离培养兔脂肪干细胞，传至第3代分为2组：对照组加入含10 mmol/Lβ-甘油磷酸钠、50 mg/L抗坏血酸、1×10-8 mol/L地塞米松、体积分数为0.15的胎牛血清的RPMI 1640骨诱导培养基，实验组在此基础上加入1 μg/L降钙素基因相关肽进行诱导培养。 主要观察指标：细胞形态学变化，免疫组织化学染色测定细胞碱性磷酸酶活性，四环素标记法检测矿化结节的形成，RT-PCR和Western blot法检测成骨细胞标志性蛋白I型胶原、骨钙素的表达。 结果：实验组脂肪干细胞经成骨诱导培养后，形态规则、多角型细胞增多，细胞倍增时间明显短于对照组。随诱导时间的延长，实验组细胞碱性磷酸酶活性呈增加趋势，诱导7，10，14 d细胞碱性磷酸酶活性均显著高于对照组(t=13.26，P < 0.01)。诱导21 d与对照组比较，实验组形成的金黄色圆形矿化结节数量增多，结节增大。诱导7 d，14 d实验组I型胶原及骨钙素mRNA、蛋白水平的表达均强于对照组。 结论：在体外降钙素基因相关肽能诱导并促进兔脂肪干细胞向成骨细胞方向分化。

Differentiation from adipose-derived stem cells into osteoblasts following induction of calcitonin gene-related peptide