| 一种简便有效的枯草杆菌质粒克隆方法 |
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| 引用本文： | 匡裕玖,周建华. 一种简便有效的枯草杆菌质粒克隆方法[J]. 华中科技大学学报(医学版), 2004, 33(2): 199-201 |
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| 作者姓名： | 匡裕玖 周建华 |
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| 作者单位： | 华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科,武汉,430030 |
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| 摘 要： | 目的 在用枯草杆菌质粒克隆并表达白喉毒素突变型DT del14 8时 ,出现A70 0T突变 ,导致Ile2 0 9Leu氨基酸取代 ,为纠正这一突变 ,设计一种简便有效的枯草杆菌质粒克隆方法。方法 首先对含I2 0 9L突变的载体PSM6 0 4 DT del14 8 I2 0 9LDNA进行计算机限制内切酶谱分析 ,以位于PflMⅠ及HindⅢ间的唯一切点的限制内切酶KpnⅠ消化 ,然后去磷酸化 ,热灭活相应酶 ,加入不含I2 0 9L突变的大肠杆菌质粒PET15b DT del14 8,再以PflMI、HindⅢ消化 ,浓缩后进行连接、转化、筛选克隆 ,最后DNA序列分析。结果 经限制内切酶消化及序列分析 ,所有转化子均含目的基因片段。载体DNA仅需 30 0ng ,转化效率达 4 5× 10 2 转化子 / μg ;结论 方法简便、有效、快捷 ,成本低、成功率高 ,值得推广和借鉴
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| 关 键 词： | 枯草杆菌 质粒 克隆 限制内切酶 DNA序列分析 |
| 修稿时间： | 2003-07-16 |
A Rapid and Effective Method for B.subtilis Plasmid Cloning |
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| Kuang Yujiu,Zhou Jianhua. A Rapid and Effective Method for B.subtilis Plasmid Cloning[J]. Journal of Huazhong University of Science and Technology(Health Sciences), 2004, 33(2): 199-201 |
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| Authors: | Kuang Yujiu Zhou Jianhua |
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| Affiliation: | Kuang Yujiu,Zhou JianhuaDepartment of Pediatrics,Tongji Hospital,Tongji Medical College,Huazhong University of Science and Technology,Wuhan 430030 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | plasmid cloning B.subtilis |
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