抗bcl-2核酶在HL-60细胞中的表达及促进其凋亡的研究 |
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引用本文: | 赵永同,王剑波,朱峰,王成济.抗bcl-2核酶在HL-60细胞中的表达及促进其凋亡的研究[J].中华血液学杂志,1996(12). |
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作者姓名: | 赵永同 王剑波 朱峰 王成济 |
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作者单位: | 西安第四军医大学 |
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摘 要: | 为消除白血病细胞中bcl-2基因对细胞凋亡的抑制作用,开辟白血病基因治疗的途径。将合成的针对bcl-2mRNA的“锤头型”核酶(Ribozyme,RZ)基因定向克隆于真核表达载体pDOR-neo,构成pDOR-RZ重组体。通过脂质体Lipofectin介导的DNA转染法,把pDOR-RZ导入HL-60细胞。用South-ern印迹,RNA斑点杂交法观察RZ基因在HL-60细胞内表达,并通过电镜、流式细胞仪(FCM),光镜和DNA电泳观察RZ对HL-60细胞的影响。结果:①RZ在转染HL-60后72小时得以表达,细胞内bcl-2蛋白合成受到抑制。②在FCM图谱上可见到明显的凋亡峰,形态观察RZ处理的HL-60细胞呈典型的凋亡形态。③足叶乙甙(促凋亡)敏感性试验表明,与未转染的细胞和转染空载体pDOR-neo的细胞相比,转染pDOR-RZ的细胞DNA电泳易出现梯状条带。结果说明RZ基因通过逆转录病毒表达载体导入HL-60细胞后可成功地表达并抑制HL-60细胞bcl-2蛋白的合成,并促进HL-60细胞凋亡
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关 键 词: | 核酶 细胞凋亡 白血病 基因表达 基因治疗 |
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