| His标记小鼠SRG-S基因的克隆和表达纯化 |
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| 引用本文： | 郭睿,张悦红,张建林,张栋,解军.His标记小鼠SRG-S基因的克隆和表达纯化[J].山西医科大学学报,2006,37(5):464-467. |
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| 作者姓名： | 郭睿 张悦红 张建林 张栋 解军 |
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| 作者单位： | 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室,太原,030001 |
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| 基金项目： | 山西医科大学校科研和教改项目 |
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| 摘 要： | 目的构建His标记的小鼠精子发生相关基因SRG-S的原核表达载体并实现其表达及纯化。方法提取小鼠睾丸组织总RNA,应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增目的基因片段,克隆入pGEM-T-easy载体,经测序正确后,定向亚克隆入pET-30a( )表达载体,转化大肠杆菌E.coliBL21(DE3),异丙基硫代--βD-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,Ni-NTA亲和层析纯化融合蛋白,并利用抗His单克隆抗体进行Western blot检测。结果RT-PCR扩增得到大小约591 bp的目的基因片段,DNA序列分析结果与GenBank公布的序列一致,SDS-PAGE电泳显示经IPTG诱导有约32 kD的重组蛋白表达,纯化后的蛋白纯度达90%以上,且Western blot印迹表明该融合蛋白具有特异的抗His抗体特性。结论采用基因克隆技术成功构建了带His标签的小鼠SRG-S原核表达载体,并获得了高纯度的重组蛋白,有利于后期抗体的制备,为进一步从蛋白质水平研究该基因的功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 原核表达 克隆 分子 遗传载体 纯化 |
| 文章编号： | 1007-6611（2006）05-0464-04 |
| 收稿时间： | 2006-03-14 |
| 修稿时间： | 2006年3月14日 |
Cloning,expression and purification of His-tagged mouse gene SRG-S |
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| GUO Rui, ZHANG Yue-hong, ZHANG Jian-lin, et al.Cloning,expression and purification of His-tagged mouse gene SRG-S[J].Journal of Shanxi Medical University,2006,37(5):464-467. |
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| Authors: | GUO Rui ZHANG Yue-hong ZHANG Jian-lin |
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| Institution: | Dept of Biochemistry and Molecular Biology, Shanxi Medical University, Taiyuan 030001, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | prokaryotic expression cloning molecular genetic vector purification |
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