重组TGF β1在大肠杆菌中的表达、纯化 |
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引用本文: | 陈 阳,刘雪婷,肖 刚,周智优,汪 炬.重组TGF β1在大肠杆菌中的表达、纯化[J].沈阳药科大学学报,2011,28(6):486-489. |
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作者姓名: | 陈 阳 刘雪婷 肖 刚 周智优 汪 炬 |
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作者单位: | 暨南大学 生命科学技术学院,广东 广州 510632 |
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基金项目: | 广东省科技攻关资助项目(2009B030801237) |
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摘 要: | 目的通过pET 43.1原核表达载体,表达重组人转化生长因子β1(human transform growth fac-tor,rhTGFβ1)。方法将人工整合了肠激酶作用位点的TGFβ1,插入到含有NusA蛋白的融合表达载体pET 43.1中。重组质粒转化大肠杆菌(E.coli)BL21(+)并用IPTG诱导表达。通过镍柱纯化重组蛋白,用Western blot杂交检测重组蛋白的免疫原性,用肠激酶酶切得到TGFβ1单体。结果 SDS-PAGE结果显示,相对分子质量约为70 000的融合蛋白大部分在上清中表达,目的融合蛋白量约占菌体总蛋白量的80%。取超声上清,通过His亲和色谱系统纯化目的融合蛋白,纯度质量分数为95%。肠激酶切割得到TGFβ1单体,经Western blot检测重组蛋白的免疫原性。结论人转化生长因子β1在大肠杆菌中实现了高效表达,获得了具有免疫原性的重组TGFβ1。
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关 键 词: | 转化生长因子β1 大肠杆菌 表达 纯化 |
收稿时间: | 2010-9-26 |
修稿时间: | 2010-12-26 |
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