Exendin-4对人脐静脉内皮细胞内质网应激损伤的拮抗作用

目的 研究exendin-4(Ex-4)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)内质网应激相关凋亡的拮抗作用.方法 RPMI1640培养基培养HUVECs,待细胞长到培养瓶底部80％左右后,分4组干预细胞,每组8瓶,共32瓶.实验分组:①正常对照组(n=8):不做任何处理；②Ex-4组(n=8):(Ex-4,8μg/mL,45 min)；③EPBS组(n=8):(EPBS,100μL/mL,30 min)；④双药组(n =8):Ex-4预处理(8μg/mL,45 min),后加EPBS(100 μL/mL,30 min).免疫荧光法检测确认HUVECs上存在胰高血糖素样肽-1受体(glucagon-like peptide-1 receptor,GLP-1R)；内源性过氧化氢酶抑制物(endogenous peroxidase blocking solution; EPBS)诱导HUVECs的凋亡,流式细胞仪检测细胞凋亡率变化；加入Ex-4预处理后,观察EPBS诱导HUVECs凋亡率的变化.Western blot检测细胞Calnexin、(C/EBP homologous protein,CHOP)和Bax表达情况,探讨内质网应激相关凋亡的机制.结果 ①HUVECs上有GLP-1受体表达；②与正常对照组相比,EPBS组HUVECs的凋亡率显著增加[(52.27±3.66)％ vs(7.25±0.62)％,P＜0.01)]；与EPBS组比较,Ex-4的预处理可明显降低EPBS诱导的HUVECs凋亡[(37.77±2.86)％ vs(52.27±3.66)％,P＜0.01)].与正常对照组相比,EPBS能增加Calnexin[(1.76±0.16) vs(1.00±0.05),P＜0.01]、CHOP[(4.58±0.32)vs(1.00±0.12),P＜0.01]和Bax[(2.25±0.10)vs(1.00±0.06),P＜0.01]的表达；与EPBS组比较,Ex-4的预处理可显著降低Calnexin[(0.42±0.05)vs(1.76±0.16),P＜0.01]、CHOP [(0.64±0.10) vs(1.65±0.12),P＜0.01]和Bax[(1.48±0.08) vs(2.25±0.10),P＜0.01)]的表达.结论 Ex-4对EPBS诱导的HUVECs凋亡有明显抑制作用,其抑制作用可能与EX-4减少内质网应激相关蛋白Calnexin、CHOP和Bax相关.

Effect of exendin-4 on human umbilical vein endothelial cells with endoplasmic reticulum stress