肝星状细胞具有向肝细胞样细胞分化的干细胞潜能

目的 探讨肝星状细胞是否能体外诱导分化为肝细胞样细胞以及在这过程中某些干细胞标记物的表达和变化.方法 采用标准胶原酶灌注联合percoll密度梯度离心法提取并纯化原代大鼠肝星状细胞,免疫荧光鉴定细胞表型；将原代肝星状细胞分为对照组和实验组进行体外培养,对照组肝星状细胞不加任何细胞因子培养24 h,实验组肝星状细胞加入bFGF 20 μg/L、FGF420 μg/L、HGF 20μg/L、IL-6 1μg/L细胞因子诱导7d;倒置相差显微镜下观察诱导细胞形态的变化,Real-time PCR和细胞免疫荧光技术检测肝星状细胞诱导前后肝细胞ALB、AFP mRNA和蛋白的表达情况,以及诱导前后干细胞标记物mRNA和蛋白水平的表达及变化.结果 ①通过胶原酶灌注联合percoll密度梯度离心法获得的大鼠肝星状细胞,其特异性蛋白Desmin和GFAP表达阳性率≥95％.②实验组大鼠肝星状细胞经过bFGF、FGF4、HGF、IL-6等细胞因子诱导7d后,与对照组细胞相比细胞形态由星形变为类圆形或多角形,转录水平出现肝细胞特异性标记物ALB的表达(P＜0.01)和AFP的表达(P＜0.05),同时实验组ALB和AFP蛋白表达呈阳性,而对照组则呈阴性.③实验组大鼠肝星状细胞经过bFGF、FGF4、HGF、IL-6等细胞因子诱导7d后,与对照组相比干细胞标记物P75NTR转录水平表达下降(P＜0.05),CD90、c-kit、sox-2、oct-4等转录水平表达显著下降(P＜0.01),并伴有干细胞标记物蛋白水平的表达下调或无表达.结论 初步证明肝星状细胞可能具有潜在的干细胞特性,在体外可诱导分化形成肝细胞样细胞,在诱导过程中肝星状细胞的干细胞标记物明显下调.

Hepatic stellate cells might possess potential capabilities of stem cells to differentiate into hepatocyte-like cells in vitro