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大鼠骨髓间充质干细胞与脱细胞脊髓支架体外共培养
引用本文:王开见,任先军,蒋涛,周长立,阴洪. 大鼠骨髓间充质干细胞与脱细胞脊髓支架体外共培养[J]. 第三军医大学学报, 2013, 35(11): 1062-1066
作者姓名:王开见  任先军  蒋涛  周长立  阴洪
作者单位:第三军医大学新桥医院骨科,重庆,400037
基金项目:the General Program of National Natural Science Foundation of China,the National Natural Science Foundation for Young Scholars of China,the Key Project of "Twelfth Five-year Plan" for Medical Science and Technology of PLA,国家自然科学基金面上项目,国家自然科学基金青年项目,全军医学科技"十二五"科研重点项目
摘    要:目的 评价脱细胞脊髓支架在大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)体外培养中的作用,探索最佳接种浓度.方法 分离、培养及鉴定SD大鼠BMSCs,诱导BMSCs向神经元样细胞分化.制备脱细胞脊髓支架,将第3代BMSCs同脱细胞脊髓支架共培养,MTT法检测细胞增殖活性,比较与普通培养的差异;取第3代BMSCs以不同浓度[(0.5、1、2、3、4)×106/mL]接种于支架(脊髓支架修整0.5 cm小段),检测细胞在支架上的粘附率及上架细胞数,建立接种浓度与细胞粘附率、上架细胞数的关系回归方程;扫描电镜观察脱细胞脊髓支架形态以及细胞与支架的粘附情况.结果 成功实现BMSCs的分离及培养,BMSCs流式鉴定CD29、CD90阳性表达,向神经元诱导胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、巢蛋白(Nestin)呈阳性表达;与普通培养相比,BMSCs在支架上细胞增殖活力显著提高(P<0.05);细胞与支架的粘附率在接种浓度为2×106/mL最高,达到(79.6±2.7)%,单位体积上架细胞数达到(1.364±0.047)×106/cm3;扫描电镜观察支架空间结构良好,细胞与支架粘附良好,共培养第3天较第1天细胞数量明显增加.结论 脱细胞脊髓支架具有多通道的空间结构,适合BMSCs粘附、存活、增殖,该支架是良好的天然脊髓组织工程材料.当粘附率及细胞上架数基本达到最大时的最佳接种浓度为2×106/mL.

关 键 词:骨髓间充质干细胞  脱细胞脊髓支架  细胞共培养  组织工程

Co-culture of rat bone marrow mesenchymal stem cells on acellular scaffold of spinal cord in vitro
Abstract:
Keywords:bone marrow mesenchymal stem cells  acellular scaffold of spinal cord  cell co-culture  tissue engineering
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