Bre1与Rad6形成的复合物的表达、纯化和结晶

目的：建立Bre1及Rad6的表达和纯化方法，构建Bre1-Rad6的复合物，寻找复合物的结晶条件，为使用X射线晶体学的方法解析复合物的结构奠定基础。方法：使用大肠杆菌表达系统表达蛋白质；使用共纯化的方法组装复合物；使用气象扩散的方法结晶复合物。结果：建立了来源于Lodderomyces elongisporus的Bre1(LeBre1)氮端与Rad6相互作用的结构域（RBD）和Rad6(LeRad6)在大肠杆菌中大量表达的方法；通过使用共纯化的方法，成功组装了LeBre1 RBD-Rad6复合物，并进一步通过两步凝胶过滤层析纯化的方法精细纯化，获得了纯度超过95%的蛋白复合物；使用气象扩散的方法结晶复合物，在18℃通过对1 000多个结晶条件的筛选，确定了复合物的两种结晶条件，进一步对该条件优化，获得了质量相对较好的晶体。结论：成功的构建了LeBre1 RBD-Rad6复合物的表达、纯化和结晶的方法，为使用X射线晶体学方法解析复合物的结构奠定了基础。