Bre1与Rad6形成的复合物的表达、纯化和结晶 |
| |
作者姓名: | 赵佳奇 石萌 向嵩 |
| |
作者单位: | (天津医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系,天津 300070) |
| |
摘 要: | 目的:建立Bre1及Rad6的表达和纯化方法,构建Bre1-Rad6的复合物,寻找复合物的结晶条件,为使用X射线晶体学的方法解析复合物的结构奠定基础。方法:使用大肠杆菌表达系统表达蛋白质;使用共纯化的方法组装复合物;使用气象扩散的方法结晶复合物。结果:建立了来源于Lodderomyces elongisporus的Bre1(LeBre1)氮端与Rad6相互作用的结构域(RBD)和Rad6(LeRad6)在大肠杆菌中大量表达的方法;通过使用共纯化的方法,成功组装了LeBre1 RBD-Rad6复合物,并进一步通过两步凝胶过滤层析纯化的方法精细纯化,获得了纯度超过95%的蛋白复合物;使用气象扩散的方法结晶复合物,在18℃通过对1 000多个结晶条件的筛选,确定了复合物的两种结晶条件,进一步对该条件优化,获得了质量相对较好的晶体。结论:成功的构建了LeBre1 RBD-Rad6复合物的表达、纯化和结晶的方法,为使用X射线晶体学方法解析复合物的结构奠定了基础。
|
关 键 词: | Bre1 Rad6 泛素化修饰 蛋白质纯化 蛋白质结晶 |
|
| 点击此处可从《天津医科大学学报》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《天津医科大学学报》下载免费的PDF全文 |