二肽基肽酶-4通过CXCR4/mTOR信号通路介导小鼠肺泡巨噬细胞MH-S自噬的机制研究

目的 探究二肽基肽酶-4（DPP-4）通过趋化因子受体4（CXCR4）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路介导小鼠肺泡巨噬细胞MH-S自噬的机制。方法 体外培养小鼠肺泡巨噬细胞MH-S并分组转染。分别设置PBS组（PBS培养MH-S细胞）、LPS组（100 ng/mL LPS诱导24 h）、DPP-4组（DPP-4表达病毒转染）、si-DPP-4组（si-DPP-4病毒载体转染）、DPP-4 + BafA1组（DPP-4表达病毒转染+自噬抑制剂BafA1干预）及si-DPP-4 + BafA1组（si-DPP-4病毒载体转染+自噬抑制剂BafA1干预）。绿色荧光蛋白（GFP）检测转染效率，稳定转染后，酶联免疫吸附试验检测MH-S细胞上清液炎症因子水平，腺病毒检测MH-S细胞自噬流变化，实时荧光定量聚合酶链反应检测细胞DPP-4、CXCR4、mTOR mRNA的表达，Western blottig检测CXCR4/mTOR通路蛋白的表达。结果 LPS组IL-1β、IL-6、TNF-α、GFP、RPF、Merge数量，CXCR4 mRNA、mTOR mRNA和CXCR4蛋白、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量高于PBS组（P <0.05）；DPP-4组与LPS组IL-1β、IL-6及TNF-α水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）；DPP-4组GFP、RPF、Merge数量，DPP-4 mRNA相对表达量高于LPS组（P <0.05），CXCR4 mRNA、mTOR mRNA、CXCR4蛋白、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量低于LPS组（P <0.05）；si-DPP-4组IL-1β、IL-6、TNF-α水平高于LPS组（P <0.05），GFP、RPF及MergeMerge数量低于LPS组（P <0.05）；si-DPP-4组和DPP-4 + BafA1组IL-1β、IL-6、TNF-α水平、CXCR4蛋白、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量高于DPP-4组（P <0.05），GFP、RPF及Merge数量低于DPP-4组（P <0.05）；si-DPP-4组DPP-4 mRNA相对表达量低于DPP-4组（P <0.05），CXCR4 mRNA、mTOR mRNA相对表达量高于DPP-4组（P <0.05）；si-DPP-4 + BafA1组IL-1β、IL-6水平、CXCR4 mRNA、mTOR mRNA、CXCR4蛋白、p-mTOR/mTOR蛋白相对表达量高于si-DPP-4组（P <0.05），GFP、RPF、Merge数量低于si-DPP-4组（P <0.05）。结论 DPP-4能够调节小鼠肺巨噬细胞自噬作用，调控炎症反应，其作用机制可能与CXCR4/mTOR通路有关。

DPP-4 mediates autophagy in mouse alveolar macrophages through CXCR4/mTOR signaling pathway