脂肪干细胞与软骨细胞共培养的实验研究

背景：有研究发现关节软骨微环境可诱导骨髓间充质干细胞向软骨细胞分化。目的：验证软骨细胞能否诱导脂肪干细胞向软骨细胞分化，以便成为组织工程构建关节软骨可能的新方法。设计、时间及地点：随机对照细胞实验，于2007-09/2008-07在南京大学生物医药生物技术国家重点实验室完成。材料：清洁级成年新西兰大白兔，雌雄不限，体质量1.5~2.0 kg。方法：分离培养原代新西兰大白兔脂肪干细胞和软骨细胞，分别种植于6孔板和插入式细胞培养皿共培养2周后，胰酶消化终止。脂肪干细胞分别行油红O染色、碱性磷酸酶检测和甲苯胺蓝染色法鉴定。主要观察指标：倒置显微镜观察共培养前后脂肪干细胞的形态变化。甲苯胺蓝染色法检测共培养后脂肪干细胞的蛋白多糖的表达水平。免疫细胞化学检测共培养后脂肪干细胞的Ⅱ型胶原的表达水平。反转录-聚合酶链反应检测蛋白多糖和Ⅱ型胶原的基因转录水平。结果：脂肪干细胞分别经油红O染色、碱性磷酸酶染色和甲苯胺蓝染色法鉴定证实，分离的细胞具有多向分化能力，是脂肪来源的间充质干细胞。共培养1周后部分脂肪干细胞变圆，2周时其蛋白多糖和Ⅱ型胶原的基因转录和蛋白表达均增高。结论：与软骨细胞共培养后，脂肪干细胞可以被诱导成软骨样细胞。

Research of co-culture of adipose derived stem cells and chondrocytes in vitro