人牙髓细胞原代培养方法的研究

目的 确定酶解消化法牙髓细胞原代培养的合适条件与时间。方法 选取年轻患者因正畸拔除的完整和无龋坏牙齿，取出牙髓，分别采用胶原酶一步法消化牙髓组织30分钟及1、2、3小时，胶原酶分步消化法，组织块法和组织块酶解法进行原代培养，倒置显微镜台盼蓝染色观察细胞解离及存活状况，免疫组化法鉴定细胞来源。结果 胰酶消化2小时后，组织块基本未解离，用0.1%胶原酶一步法消化1、2、3小时后组织块均彻底解离为单细胞，基本无残余。0.1%胶原酶消化30分钟后组织块解离不完全，0.1%胶原酶分步法消化1小时后组织解离彻底，台盼蓝染色表明经胶原酶一步法消化获得的牙髓细胞被台盼蓝着色的比例随消化时间减短而下降，分步法消化细胞着色率低于一步法，组织块酶解法的组织块解离，贴附和细胞游出状况均优于组织块法。结论 Ⅰ型胶原酶在37℃，持续振荡条件下消化1小时是彻底酶解消化人牙髓的最短时间，分步酶解法能获得比一步酶解法更高的活细胞数量，而从效果，操作难易和耗时多少等多方面因素综合考虑，组织块酶解法是人牙髓组织原代培养的最佳方法。