| 重组组蛋白去乙酰化酶2-pEGFP-C2质粒的构建及表达 |
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| 引用本文： | 章慧,黄成,卞尔保,赵斌,吴宝明,刘昌伟,陈小霞,李俊.重组组蛋白去乙酰化酶2-pEGFP-C2质粒的构建及表达[J].中国药理学通报,2014(6):812-816. |
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| 作者姓名： | 章慧 黄成 卞尔保 赵斌 吴宝明 刘昌伟 陈小霞 李俊 |
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| 作者单位： | ;1.安徽医科大学药学院;2.安徽医科大学肝病研究所 |
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| 摘 要： | 目的将组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)基因克隆入pEGFP-C2载体,探讨构建的质粒转染进非洲绿猴肾成纤维细胞COS-7株相关蛋白和mRNA的表达及蛋白分布部位的情况。方法从人肝癌细胞(HepG2)中获得组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)的cDNA,采用Xho I和BamH I双酶切,用T4连接酶将该cDNA连接pEGFP-C2质粒,将构建成功的pEGFP-C2-HDAC2质粒经PCR、限制性内切酶酶切和测序鉴定后转染非洲绿猴肾成纤维细胞(COS-7),荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达,RT-PCR和Western blot鉴定HDAC2的表达。结果双酶切鉴定可见HDAC2质粒片段,转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达,PCR结果可检测到HDAC2 mRNA表达,同时Western blot可检测HDAC2蛋白和GFP蛋白的表达。结论成功构建了重组pEGFP-C2-HDAC2表达质粒,HDAC2蛋白可与绿色荧光蛋白在COS-7细胞中融合表达。
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| 关 键 词： | 组蛋白去乙酰化酶2 COS-7 融合蛋白 pEGFP-C2 HepG2 绿色荧光蛋白 |
Construction and expression of a pEGFP-C2-HDAC2 recombinant plamid |
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