miR-204-5p对卵巢早衰大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的调控机制

【摘要】目的 探讨微小RNA（miR）-204-5p对卵巢早衰（POF）大鼠卵巢颗粒细胞凋亡的影响及调控机制。方法 体外分离大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs），将含有miR-204-5p基因反义寡核苷酸序列的重组慢病毒载体转入BMSCs，获得稳定转染LV-rno-ASO-miR-204-5p的BMSCs细胞。选取动情周期正常的75只SPF级雌性Wistar大鼠，随机分为对照组、POF组、BMSCs组、shRNA组、shRNA-BMSCs组，每组各15只。除对照组外，均采用腹腔注射顺铂法制备POF模型。shRNA组、BMSCs组及shRNA-BMSCs组分别双侧卵巢注射慢病毒载体、BMSCs细胞及稳定转染慢病毒载体的BMSCs细胞，对照组和POF组注射生理盐水。观察各组动情周期恢复情况，比较各组干预前、干预28 d后血清促卵泡生成素（FSH）、雌二醇（E2）水平，观察卵巢组织形态、卵泡颗粒细胞凋亡率，检测卵巢组织miR-204-5p mRNA及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）、B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）mRNA和蛋白表达。结果 干预后，POF组大鼠动情周期未恢复；BMSCs组、shRNA组及shRNA-BMSCs组动情周期均有所恢复，其中shRNA-BMSCs组动情周期恢复率均高于BMSCs组及shRNA组（P＜0.05）。病理染色显示，BMSCs组、shRNA组及shRNA-BMSCs组始基卵泡、初级卵泡、次级卵泡及窦卵泡数量均多于POF组，但仍少于对照组（P＜0.05）；shRNA-BMSCs组上述各级卵泡数量多于BMSCs组和shRNA组（P＜0.05）。BMSCs组、shRNA组及shRNA-BMSCs组血清FSH水平、卵巢颗粒细胞凋亡率、卵巢组织中miR-204-5p mRNA及MAPK、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量均低于POF组，且shRNA-BMSCs组低于BMSCs组和shRNA组，但仍高于对照组（P＜0.05）；BMSCs组、shRNA组及shRNA-BMSCs组血清E2水平及卵巢组织Bcl-2 mRNA和蛋白相对表达量均高于POF组，且shRNA-BMSCs组高于BMSCs组和shRNA组，但仍低于对照组（P＜0.05）。shRNA组与BMSCs组比较，卵巢组织miR-204-5p mRNA相对表达量较低（P＜0.05），各级卵泡数量、血清FSH、E2水平、卵巢颗粒细胞凋亡率及卵巢组织MAPK、Bcl-2、Bax、Caspase-3 mRNA和蛋白相对表达量差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论 下调miR-204-5p表达可增强BMSCs对POF大鼠卵巢结构和功能的改善作用，抑制卵巢颗粒细胞凋亡，可能与下调MAPK、Bcl-2、Bax、Caspase-3基因和蛋白表达有关。

Effect and mechanism of miR-204-5p on apoptosis of ovarian granulosa cells in rats with premature ovarian failure