| 消减免疫法制备抗肝癌凋亡细胞相关抗原单克隆抗体 |
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| 引用本文： | 杨连君,司晓辉,王文亮. 消减免疫法制备抗肝癌凋亡细胞相关抗原单克隆抗体[J]. 医学争鸣, 2001, 22(18): 1720-1723 |
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| 作者姓名： | 杨连君 司晓辉 王文亮 |
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| 作者单位： | 1. 第四军医大学基础部病理学教研室
2. 上海第二医科大学第九人民医院口腔医学研究所 |
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| 摘 要： | 目的 分析肝癌细胞凋亡过程中相关分子的表达情况 ,制备抗凋亡相关抗原的 m Ab.方法 用 6 0 m L· L- 1乙醇作用 6 h诱导 HCC- 92 0 4细胞凋亡 . May- Grunwald- Giemsa(MGG)法染色观察细胞形态 .流式细胞仪分析细胞 DNA含量 .环磷酰胺消减免疫法免疫 10只小鼠 ,另取 10只小鼠用常规法免疫作为对照 .末次免疫后取鼠尾血清进行免疫细胞化学法检测 .选取尾血清与凋亡细胞和非凋亡细胞的反应差异最明显者取脾细胞 ,与骨髓瘤细胞 SP2 /0融合 . EL ISA法筛选 .计算杂交瘤细胞融合率和抗体阳性率 .有限稀释法连续克隆化 .免疫细胞化学法进一步筛选 .Western blot法分析m Ab相关抗原的分子质量 .结果 MGG染色可见大部分细胞出现凋亡 .流式细胞仪分析可见亚二倍体凋亡峰 .实验组有 2只鼠的尾血清在凋亡细胞呈强阳性 ,而与非凋亡细胞的反应很弱 .两组的细胞融合率无明显差异 ;在凋亡细胞高表达 ,而在非凋亡细胞低表达的抗体的产生率也未见明显差异 .实验组总的抗体产生率明显低于对照组 (P<0 .0 1) ,在凋亡细胞与非凋亡细胞均高表达的抗体的产生率也明显低于对照组 (P<0 .0 1) .筛选出 1株在乙醇诱导的 HCC- 92 0 4凋亡细胞核内高表达 ,而在非凋亡的 HCC- 92 0 4细胞低表达的 m Ab.此 m Ab相关抗原的相对分子
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| 关 键 词： | 免疫法 脱噬作用 单克隆抗体 肝细胞癌 |
| 文章编号： | 1000-2790(2001)18-1720-04 |
| 修稿时间： | 2001-05-31 |
Preparation of mAb against apoptosis-associated antigen of hepatoma cells with subtractive immunization |
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| YANG Lian-Jun,SI Xiao-Hui,WANG Wen-Liang. Preparation of mAb against apoptosis-associated antigen of hepatoma cells with subtractive immunization[J]. Negative, 2001, 22(18): 1720-1723 |
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| Authors: | YANG Lian-Jun SI Xiao-Hui WANG Wen-Liang |
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| Affiliation: | YANG Lian-Jun1,SI Xiao-Hui2,WANG Wen-Liang1 1Department of Pathology,Faculty of Preclinical Medicine,Fourth Military Medical University,Xi'an 710033,China,2Institute of Stomatolog y,Ninth People's Hospital,Shanghai Second Medical Universi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | immunization apoptosis antibodies monoclonal carcin oma hepatocellular |
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