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| 分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定 | |
| 引用本文： | 魏炎,郏雁飞,郑燕,马晓丽,汪运山.分化型胚胎软骨发育基因1特异性小干扰RNA表达质粒的构建和鉴定[J].中国组织工程研究与临床康复,2011,15(24). |
| 作者姓名： | 魏炎 郏雁飞 郑燕 马晓丽 汪运山 |
| 作者单位： | 1. 山东省医学科学院基础医学研究所,山东省济南市,250062 2. 山东大学附属济南市中心医院,山东省济南市,250013 3. 山东省医学科学院基础医学研究所,山东省济南市250062;山东大学附属济南市中心医院,山东省济南市,250013 |
| 基金项目： | 济南市科技局科技计划项目，国家自然科学基金 |
| 摘 要： | 背景:分化型胚胎软骨基因1 可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子,与肿瘤的发生发展有着重要的联系.目的:构建针对人分化型胚胎软骨基因1 的小干扰RNA 表达载体.方法:从NCBI 中查找人分化型胚胎软骨基因1 基因全长mRNA 序列,利用Katahdin 提供的在线小干扰 RNA 模板序列设计软件,设计针对分化型胚胎软骨基因1 的2 条shRNA 的 DNA 模板单链,合成靶向分化型胚胎软骨基因1 基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的pGreenPuro.shRNA Cloning and Expression Lentivector 质粒连接,在JM-109 菌株中扩增,并进行质粒DNA 琼脂糖凝胶电泳分析、紫外分光光度计检测、菌落PCR 以及测序鉴定.结果与结论:将含有分化型胚胎软骨基因1 目标序列25 bp 的双链 DNA 插入片段,连接到pGreenPuro.shRNA Cloning and Expression Lentivector 质粒形成重组质粒.质粒DNA 琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可用于后续实验.菌落PCR 结果表明产物大小约为170 bp,与预期相符.测序结果表明pGreenPuro.shRNA Cloning and Expression Lentivector 质粒已经插入人分化型胚胎软骨基因1 的干扰合成片段,无碱基突变.成功构建了靶向分化型胚胎软骨基因1-小干扰 RNA 表达载体. |
| 关 键 词： | 分化型胚胎软骨基因1 小干扰 构建 质粒 基因表达 |
Construction and identification of small interfering RNA expression plasmid target to differentiated embryo-chondrocyte expressed gene 1 |
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| Wei Yan,Jia Yan-fei,Zheng Yan,Ma Xiao-li,Wang Yun-shan.Construction and identification of small interfering RNA expression plasmid target to differentiated embryo-chondrocyte expressed gene 1[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2011,15(24). | |
| Authors: | Wei Yan Jia Yan-fei Zheng Yan Ma Xiao-li Wang Yun-shan |
| Institution: | Wei Yan1,Jia Yan-fei2,Zheng Yan2,Ma Xiao-li2,Wang Yun-shan1,2 1Institute of Basic Medicine,Shandong Academy of Medical Sciences,Jinan 250062,Shandong Province,China,2Jinan Central Hospital,Shandong University,Jinan 250013 |
| Abstract: | |
| Keywords: | RNA |
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