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| Flt3配体胞外域的原核表达纯化及对脐血CD34+细胞的扩增作用 | |
| 引用本文： | 刘强,郑瑾,赵星成,尹郸丹,陈任安,刘利,郝淼旺,梁英民.Flt3配体胞外域的原核表达纯化及对脐血CD34+细胞的扩增作用[J].中国组织工程研究与临床康复,2011,15(19). |
| 作者姓名： | 刘强 郑瑾 赵星成 尹郸丹 陈任安 刘利 郝淼旺 梁英民 |
| 作者单位： | 1. 解放军第四军医大学唐都医院,血液内科,陕西省西安市,710038 2. 解放军第四军医大学唐都医院,中医科暨中西医结合肿瘤科,陕西省西安市,710038 3. 解放军第四军医大学医学遗传与发育生物学教研室,陕西省西安市,710032 |
| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
| 摘 要： | 背景:Fms 样酪氨酸激酶3配体(Flt3配体)是一种重要的生长因子,通过激活特定的酪氨酸激酶受体,调控造血细胞的生长、生存和/或分化,具有促进造血干细胞体外扩增的应用潜力.目的:构建pET32a(+)-hFLext原核表达载体,表达、纯化hFLext蛋白,观察其对脐血CD34+细胞的扩增作用.方法:克隆hFLext,构建pET32a(+)-hFLext重组表达载体.转化大肠杆菌 BL21,IPTG诱导蛋白表达,镍珠亲合层析纯化蛋白.磁珠分选脐血CD34+细胞,单独加入hFLext或联合干细胞因子、血小板生成素孵育1周,观察体外扩增作用.结果与结论:成功克隆hFLext,并构建了pET32a(+)-hFLext重组表达载体.在大肠杆菌BL21成功表达Trx-hFLext融合蛋白,经8 mol/L尿素变性包涵体蛋白,逐步透析复性,镍珠亲合层析纯化蛋白,成功获得高纯度的Trx-hFLext融合蛋白.Trx-hFLext融合蛋白不仅具有维持及轻度刺激CD34+细胞体外扩增的作用,并且与干细胞因子及血小板生成素具有协同作用,为造血干/祖细胞体外扩增研究奠定了基础. |
| 关 键 词： | Flt3配体 载体 |
Prokaryotic expression and purification in Flt3 ligand extracellular domain and effects on cord blood CD34+ cells amplification |
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| Liu Qiang,Zheng Jin,Zhao Xing-cheng,Yin Dan-dan,Chen Ren-an,Liu Li,Hao Miao-wang,Liang Ying-min.Prokaryotic expression and purification in Flt3 ligand extracellular domain and effects on cord blood CD34+ cells amplification[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2011,15(19). | |
| Authors: | Liu Qiang Zheng Jin Zhao Xing-cheng Yin Dan-dan Chen Ren-an Liu Li Hao Miao-wang Liang Ying-min |
| Abstract: | BACKGROUND: Fms-like tyrosine kinase 3 ligand (Flt3 ligand,FL) is a cytokine that affects the growth,survival and/or differentiation of hematopoietic cells through the activation of specific tyrosine kinase receptors,and it is potentially useful for in vitro hematopoietic stem cells (HSCs) amplification.OBJECTIVE: To construct the recombinant prokaryotic expression vector pET32a(+)-hFLext,and to express and purify hFLext protein and investigate its effect on expansion of cord blood CD34+ cells.METHODS: The ... |
| Keywords: | CD34+ hFLext Trx-hFLext |
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