| 摘 要： | 目的应用生物信息学软件分析鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白的结构和功能,观察其对人源THP-1巨噬细胞凋亡的影响。方法在NCBI数据库中获取鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白编码基因及其氨基酸序列信息,运用ProtParam、ProtScale、TMPred、SignalIP、SOPMA、SWISS-MODEL等在线工具对鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白进行生物信息学分析。提取全基因组DNA,进行PCR扩增、载体构建得到鸟分枝杆菌MAV-2921基因的重组表达质粒,经诱导表达和分离纯化后获得重组MAV-2921蛋白。将重组蛋白MAV-2921作用于人源THP-1巨噬细胞,ELISA法检测细胞上清液TNF-α表达量的变化,流式细胞术检测巨噬细胞凋亡率。结果鸟分枝杆菌MAV-2921基因全长285 bp,为编码94个氨基酸的蛋白质。该MAV-2921蛋白是稳定的亲水性蛋白,有1个跨膜区段,无信号肽;二级结构以α-螺旋为主,三级结构模型构建显示该蛋白为单体蛋白,不形成二聚体。利用大肠埃希菌表达系统制备了重组鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白,将重组MAV-2921蛋白作用于人源THP-1巨噬细胞,与对照组相比细胞上清液TNF-α含量升高(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05)。结论鸟分枝杆菌MAV-2921蛋白为稳定的、亲水性跨膜蛋白,对人源THP-1巨噬细胞具有促凋亡作用。
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