Rab32促进树突状细胞内BCG增殖的实验研究北大核心CSCD

目的探讨Rab32(Ras-related proteins in brain 32)在树突状细胞(dendritic cells,DCs)内卡介苗(Bacillus Calmette-Guérin,BCG)感染中的作用。方法通过小鼠DC2.4细胞建立BCG感染模型,通过RNA-Seq技术检测BCG感染后DCs内Rab基因的表达变化;通过生信分析筛选BCG感染后差异表达的Rab蛋白;western blot法检测BCG感染后DC2.4细胞内Rab32蛋白的表达情况;采用慢病毒转染技术制备EYFP-Rab32过表达DC2.4细胞(EYFP-Rab32 DC2.4细胞),采用western blot法和流式细胞术进行转染效率验证;通过细胞载菌量实验检测EYFP-Rab32 DC2.4细胞内BCG的增殖;采用western blot法检测磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶(protein kinase B,AKT)通路蛋白的变化。结果DC2.4细胞中存在55种Rab蛋白,BCG感染后10种Rab蛋白的表达水平发生明显变化;Rab32蛋白随着感染时间的增加而增加,感染0 h和48 h时Rab32表达显著增加(P<0.05)。BCG感染EYFP-Rab32 DC2.4细胞48 h时BCG载菌量为(60.16±4.69)×10^(4)CFU/孔,较DC2.4细胞明显增多(21.09±1.56)×10^(4)CFU/孔](P<0.01);这可能与Rab32过表达导致BCG感染DC2.4细胞后p-PI3K/PI3K,p-AKT/AKT增多(P<0.05),即Rab32激活PI3K/AKT通路相关。结论Rab32可能通过调控PI3K/AKT通路促进DCs内BCG增殖。