| 摘 要： | 目的 利用肝片吸虫重组蛋白Fh010935建立绵羊肝片吸虫感染间接ELISA检测方法。方法 通过对抗原包被量、血清稀释度、血清孵育时间、封闭剂种类、二抗稀释倍数及孵育时间、TMB底物溶液反应时间等条件进行优化,建立间接ELISA检测方法,评价其敏感性、特异性和重复性,并对吉林和内蒙古地区临床血清样品进行检测。结果 ELISA优化试验确定的抗原最佳包被浓度为0.25μg/孔,血清稀释度为1∶400,血清孵育时间为90 min,封闭剂为1%BSA,二抗稀释倍数为1∶5000,二抗孵育时间为75 min,TMB底物溶液反应时间为15 min。优化各反应条件后建立的ELISA检测方法敏感性达到1∶800,与羊捻转血矛线虫、双腔吸虫、新孢子虫阳性血清无免疫交叉反应,批内批间变异系数均<6%。对吉林省某地区临床血清样品和粪便样品各36份进行ELISA和病原学检测,两种方法一致性为96%。对内蒙古地区90份临床血清样品进行检测,阳性率为18.9%。结论 以肝片吸虫重组蛋白Fh010935为包被抗原建立的检测绵羊肝片吸虫感染的间接ELISA方法具有较好的敏感性、特异性和重复性,可用于绵羊肝片吸虫病的快速检测及流行病学调查。
|
