| 新型冠状病毒3C样蛋白酶的原核表达及其多克隆抗体的制备北大核心CSCD |
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| 引用本文： | 郑皖怿,李瑞芳,徐海山,宋桃花,高岩,陈柯,伊正君,付玉荣.新型冠状病毒3C样蛋白酶的原核表达及其多克隆抗体的制备北大核心CSCD[J].中国病原生物学杂志,2022(1):18-21. |
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| 作者姓名： | 郑皖怿 李瑞芳 徐海山 宋桃花 高岩 陈柯 伊正君 付玉荣 |
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| 作者单位： | 1.潍坊医学院基础医学院261053;2.潍坊医学院医学检验学院; |
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| 基金项目： | 山东省自然科学基金重点项目(No.ZR2018ZC1054)。 |
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| 摘 要： | 目的表达及纯化新型冠状病毒(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS-CoV-2)3C样蛋白酶(3-chymotrypsin-like protease,3CL^(pro))并制备3CL^(pro)多克隆抗体。方法将重组质粒pET28a-Proteinase_3CL-pro转化大肠埃希菌BL21(DE3),利用IPTG诱导重组蛋白表达,超声破碎后用SDS-PAGE凝胶分析蛋白表达情况,利用Ni-NTA进行重组蛋白的纯化。用重组蛋白免疫4~8周龄健康小鼠,制备多克隆抗体,通过Western blot和ELISA对抗体进行定性和定量检测。结果重组蛋白His-3CL^(pro)在重组菌培养上清中高表达,分子质量单位为33.8 ku。制备的多克隆抗体可特异结合重组蛋白3CL^(pro),ELISA检测血清抗体效价可达1∶204800。结论在大肠埃希菌中成功表达3CL^(pro),免疫小鼠并制备高效价的鼠抗3CL^(pro)多克隆抗体,为研究3CL^(pro)功能进而开发新型冠状病毒检测试剂盒及治疗药物奠定了基础。
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| 关 键 词： | 新型冠状病毒(SARS-CoV-2) 3C样蛋白酶(3CL^(pro)) 原核表达 多克隆抗体 |
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