| 摘 要： | 目的:亨廷顿氏症(Huntington’s disease,HD)是一种常染色体显性遗传的神经退行性疾病,典型症状包括舞蹈样症状、认知和精神障碍。目前尚无有效延缓病程的治疗措施,以对症治疗为主。小檗碱是从小檗科植物中提取的异喹啉类生物碱,也可人工合成,安全性高。因其易于透过血脑屏障,所以在中枢神经系统的作用也得到了广泛研究。研究发现,小檗碱可以显著抑制HD转基因小鼠脑内m Htt的表达。蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)在调控HD神经细胞生存过程中发挥关键作用,小檗碱是否可以通过影响PKC及其下游激酶,进而发挥细胞保护作用,对抗HD进程是本研究的重点。方法:本实验采用小鼠纹状体注射喹啉酸(quinolinic acid,QA)模型,通过转棒实验、抓力测试、Y迷宫、新物体辨别等行为学方法,考察小檗碱对QA致小鼠运动障碍和学习记忆障碍的影响;通过TTC染色考察小檗碱对纹状体损伤面积的影响;通过生化试剂盒和Elisa试剂盒考察小檗碱对纹状体炎症因子、谷氨酸含量、琥珀酸脱氢酶(succinatedehydrogenase,SDH)活性的影响;通过WB考察小檗碱对PKC及其下游激酶表达的影响。结果:与模型组小鼠相比,小檗碱显著延长转棒实验潜伏期,提高抓力水平;Y迷宫和新物体实验结果表明,小檗碱显著提高小鼠的自发交替反应率和优先指数,提示小檗碱可以改善QA致小鼠运动障碍、肌肉无力、空间记忆和工作记忆障碍。与模型组小鼠相比,小檗碱显著降低TTC阳性染色面积,提高纹状体PSD95和SYP蛋白表达,提示小檗碱可以改善QA致小鼠纹状体细胞损伤。生化检测结果表明,与模型组小鼠相比,小檗碱显著降低纹状体谷氨酸、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和一氧化氮(nitric oxide,NO)含量,提高SDH活性、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和过氧化氢酶(catalase,CAT)含量;Elisa结果表明,与模型组小鼠相比,小檗碱显著降低纹状体肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和IL-18水平,提示小檗碱可以对抗QA致小鼠纹状体氧化应激和炎症因子释放。WB结果表明,小檗碱激活纹状体PKC及其下游激酶细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)、环磷腺苷效应元件结合蛋白(c AMPresponse element binding protein,CREB),抑制激酶GSK3β表达。结论:盐酸小檗碱对纹状体注射QA致小鼠的运动障碍和学习记忆障碍具有改善作用,其机制可能与激活PKC及其下游激酶ERK、CREB,抑制激酶GSK3β,对抗氧化应激和炎症因子释放有关。
|
