| 含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒 |
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| 引用本文： | 陈瑾君,刘伟,刘德莉,陆峻泓,李卿,崔磊,曹谊林.含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒[J].上海交通大学学报(医学版),2004,24(4). |
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| 作者姓名： | 陈瑾君 刘伟 刘德莉 陆峻泓 李卿 崔磊 曹谊林 |
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| 作者单位： | 上海第二医科大学第九人民医院整复外科,上海市组织工程研究重点实验室,上海,200011 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展计划(973计划)，上海市重点学科项目 |
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| 摘 要： | 目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩.方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因.收集该GP2-293细胞产生的重组病毒作滴度测定,并通过低温超速离心制成含GFP病毒的浓缩液,再感染NIH3T3细胞,观察GFP在NIH3T3细胞内的表达情况.结果 GFP-RV质粒转染PT67细胞产生的GFP阳性克隆,随着细胞传代过程,GFP的表达逐渐减弱.GP2-293细胞转染VSV-G 基因后可产生(7.5±1.4)×l05cfu/mL的GFP重组假病毒,将其浓缩液转染NIH3T3细胞,可见GFP在细胞内有较强的表达.结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以形成高滴度的假病毒,由此得到含GFP基因的病毒上清液,其在组织工程中应用范围更广泛.
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| 关 键 词： | 疱疹性口腔炎病毒糖蛋白 绿色荧光蛋白 转染 假病毒 |
Generation of high titer pseudotyped GFP-retroviruses by co-transfaction of VSV-G gene |
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