| 编码绿色荧光蛋白和βARKct的重组腺病毒的制备 |
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| 引用本文： | 单志新,郑猛,余细勇,林秋雄,符永恒,谭虹虹,林曙光. 编码绿色荧光蛋白和βARKct的重组腺病毒的制备[J]. 中山大学学报(医学科学版), 2005, 26(4): 392-395 |
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| 作者姓名： | 单志新 郑猛 余细勇 林秋雄 符永恒 谭虹虹 林曙光 |
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| 作者单位： | 广东省心血管病研究所冠心病研究重点实验室,广东,广州,510080 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，广东省自然科学基金，广东省医药卫生科研项目 |
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| 摘 要： | [目的]制备编码绿色荧光蛋白(GFP)和Gβγ活性抑制剂βARKct的重组腺病毒载体.[方法]构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-βARKct,经PmeI线性化后转化入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-I的BJ5183菌,筛选获得重组腺病毒质粒pAdEasy-gfp-βARKct.用LipoFectamine 2000将经PacI线性化的pAdEasy-gfp-βARKct转染入人胚肾293细胞,包装并扩增出重组腺病毒颗粒rAd-gfp-βARKct.用氯化铯高速梯度离心、纯化rAd-gfp-βARKct.用rAd-GFP-βARKct干预去甲肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大过程,观察对β肌球蛋白重链(βMHC)基因表达的影响.[结果]将pAdTrack-CMV-βARKct转入含pAdEasy-I的BJ5183菌后获得20%的阳性重组体克隆.重组腺病毒质粒在293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有βARKct编码基因.透析纯化得到重组腺病毒滴度为6.0×106 pfu/mL.rAd-GFP-βARKct表达的βARKct可抑制乳鼠心肌细胞βMHC的高表达.[结论]成功构建重组腺病毒载体,并在293细胞中包装、制备出可表达βARKct的重组腺病毒rAd-gfp-βARKct.
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| 关 键 词： | 同源重组 腺病毒 G蛋白 |
| 文章编号： | 1672-3554(2005)04-0392-04 |
| 修稿时间： | 2004-12-13 |
Preparation of GFP-βARKct-contained Recombinant Adenovirus |
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| SHAN Zhi-xin,Zheng Meng,YU Xi-yong,LIN Qiu-xiong,FU Yong-heng,TAN Hong-hong,LIN Shu-guang. Preparation of GFP-βARKct-contained Recombinant Adenovirus[J]. Journal of Sun Yatsen University(Medical Sciences), 2005, 26(4): 392-395 |
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| Authors: | SHAN Zhi-xin Zheng Meng YU Xi-yong LIN Qiu-xiong FU Yong-heng TAN Hong-hong LIN Shu-guang |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | homologous recombination adenoviruses G protein |
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